塞來昔布對膠質(zhì)瘤的抑制作用及其分子機制的研究.pdf

1、第一部分 COX-2在星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)及其與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡和P-GP蛋白的關(guān)系 目的:;探討環(huán)氧化酶-2(COX-2)在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡的關(guān)系，以及COX-2蛋白和多重耐藥基因-1(MDR1)產(chǎn)物P-糖蛋白(P-GP)的關(guān)系。 方法:采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測80例星形細(xì)胞瘤患者和10例正常腦組織COX-2、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)和P-GP的表達(dá)，用末端轉(zhuǎn)移標(biāo)記法(TUNEL)檢

2、測腫瘤組織的凋亡，根據(jù)PCNA和凋亡陽性細(xì)胞所占的比例，分別計算其增殖指數(shù)(PI)和凋亡指數(shù)(AI)。 結(jié)果:星形細(xì)胞瘤組織中COX-2的陽性表達(dá)率明顯高于對照組，并與星形細(xì)胞瘤的病理分級有關(guān)，高度惡性組的陽性率明顯高于低度惡性組，PI在星形細(xì)胞瘤中明顯高于對照組，且COX-2陽性組高于陰性組；AI在星形細(xì)胞瘤中明顯高于對照組，而COX-2陽性組低于陰性組；P-GP蛋白在星形細(xì)胞瘤中的表達(dá)明顯高于對照組(P＜0.05)，且COX

3、-2陽性組明顯高于陰性組。 結(jié)論:COX-2的過表達(dá)可抑制星形細(xì)胞瘤細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，并和星形細(xì)胞瘤的化療耐藥有關(guān)，在星形細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展和治療中起重要作用。 第二部分 塞來昔布對膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞株化療敏感性的影響 目的:探討環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑塞來昔布(Celecoxib)體外對膠質(zhì)瘤生長的影響，以及對膠質(zhì)瘤化療敏感性的影響；并分析其機制。 方法:培養(yǎng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)

4、胞株，以MTT法檢測化療藥物阿霉素(Adriamycin，ADM)對腫瘤細(xì)胞抑制率；將U251分為分為4組，A組分別加入Celecoxib，B組加入ADM，C組加入二者的混合溶液，D組加入生理鹽水為對照組，以MTT法檢測腫瘤細(xì)胞生長抑制率；以RT-PCR檢測細(xì)胞MDR1基因的表達(dá)，Western-blot法檢測各組細(xì)胞P-GP蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:MTT法顯示Celecoxib及ADM可在體外抑制U251細(xì)胞株的生長，聯(lián)合使用兩藥

5、物后，腫瘤細(xì)胞的抑制率明顯增加；同時RT-PCR檢測細(xì)胞MDR1基因的表達(dá)可見B組MDR1mRNA表達(dá)明顯增強，和其他三組比較有顯著差異(P＜0.01)；同時C組的MDR1mRNA的表達(dá)也高于另外兩組；Western-blot檢測四組腫瘤細(xì)胞P-GP蛋白的表達(dá)，見單用B組的表達(dá)最為明顯，與其他三組相比較有明顯差異，C組P-GP的表達(dá)比B組低，但較其他兩組高(P＜0.01)。 結(jié)論:塞來昔布在體外能抑制膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞株的生長，

6、并能降低MDR1基因的表達(dá)，進(jìn)而降低其產(chǎn)物P-GP蛋白的表達(dá)，增強膠質(zhì)瘤對化療的敏感性。 第三部分 塞來昔布對膠質(zhì)瘤血管形成及細(xì)胞周期的影響 目的：探討COX-2抑制劑塞來昔布(Celecoxib)對膠質(zhì)瘤體內(nèi)生長的影響，以及對膠質(zhì)瘤血管生成、凋亡和細(xì)胞周期的影響。 方法：采用膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251接種裸鼠后，分為治療組和對照組，治療組通過灌腸法使用Celecoxib，對照組不給藥，4周后，處死裸鼠，剝離腫

7、瘤，分別測量腫瘤重量；腫瘤組織HE染色；流式細(xì)胞術(shù)檢測藥物對腫瘤細(xì)胞凋亡的影響；免疫組化檢測腫瘤組織的微血管密度(MVD)。 結(jié)果：HE染色證實腫瘤為典型的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤；治療組和對照組的腫瘤重量分別為(151.3±23.85)mg和(325.2±37.34)mg，差異有顯著性，治療組流式細(xì)胞儀檢測可見凋亡增多，S、G2期細(xì)胞減少，G0和G1期細(xì)胞增多，免疫組化可見微血管染色為棕黃色，治療組和對照組分別為(25.7±3.25)/H