黃芪皂苷Ⅱ和Ⅳ對人肝癌細胞BEL-7402-5-FU的耐藥逆轉(zhuǎn)作用及其機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、安徽醫(yī)科大學碩士學位論文黃芪皂苷Ⅱ和Ⅳ對人肝癌細胞BEL74025FU的耐藥逆轉(zhuǎn)作用及其機制研究姓名:王培培申請學位級別:碩士專業(yè):藥理指導教師:許杜娟20100301安徽醫(yī)科大學碩士學位論文4價ASⅡ、ASⅣ對肝癌耐藥細胞的逆轉(zhuǎn)作用,并從mdr1、Bax、Bcl2基因水平和Pgp蛋白表達量探討逆轉(zhuǎn)耐藥的作用機制。方法1.70﹪乙醇回流提取,水飽和正丁醇萃取,D101大孔吸附樹脂富集純化黃芪總苷,硅膠柱層析分離不同的皂苷組分。2.薄層色

2、譜法、高效液相-示差檢測器法分別進行皂苷類成分的鑒定及含量測定。3.選擇人肝癌敏感細胞株BEL7402、肝癌耐藥細胞株BEL74025FU做為實驗細胞,采用MTT法測定細胞株對三種化療藥物(5FU、ADR、MMC)的敏感性和耐藥倍數(shù)。4.MTT比色法測定(0.04,0.08,0.16,0.32,0.64)mgmL的ASⅡ及(0.04,0.08,0.16,0.32,0.64)mgmL的ASⅣ對BEL7402和BEL74025FU細胞的劑量

3、效應曲線,并根據(jù)上述實驗結(jié)果確定逆轉(zhuǎn)耐藥劑量。5.選擇無細胞毒作用的ASⅡ、ASⅣ劑量作用BEL74025FU細胞,MTT法檢測細胞存活率,求出逆轉(zhuǎn)倍數(shù)。6.RTPCR和免疫細胞化學法分別檢測mdr1mRNA表達和Pgp蛋白表達。7.流式細胞儀檢測ASⅡ、ASⅣ對細胞內(nèi)Rho123的蓄積影響及細胞凋亡。8.采用RTPCR檢測Bax、Bcl2mRNA表達。結(jié)果1.從黃芪總苷中分離出六種化合物(ASⅠ~ASⅥ),其中ASⅠ部分經(jīng)鑒定主要含黃

4、芪皂苷Ⅱ,含量為29.4﹪,ASⅢ部分經(jīng)鑒定主要含黃芪皂苷Ⅳ,含量為22.82﹪。其余4個部分有待于進一步鑒定。2.BEL74025FU細胞對5FU、ADR、MMC三種化療藥物均顯示耐藥性,耐藥倍數(shù)分別為19.64,1.98,1.92。3.ASⅡ(0.04,0.08mgmL)、ASⅣ(0.04,0.08mgmL)能夠提高5FU對BEL74025FU的細胞毒作用,ASⅡ逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.49,1.81,ASⅣ逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為1.70,1.86。4.

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