雙苯氟嗪腦保護作用的分子機制.pdf

1、河北醫(yī)科大學博士學位論文雙苯氟嗪腦保護作用的分子機制姓名：張英俊申請學位級別：博士專業(yè)：藥理學指導教師：王永利20040401中文摘要我們知道，轉錄因子N F ．K B 受外界刺激因素活化后，作用于靶基因，可迅速誘導基因表達。實驗證到‘3 j ，N F ．v ．B 通過對基因( 如i N O S ，T N F ．a等) 表達的調控從而調節(jié)免疫及炎癥反應，而i N O S ，T N F —d 等的表達反過來刺激N F ．r ．B 的進一步

2、活化，從而形成正反饋效應，造成組織損傷。實驗表明，N F - r , B 的激活具有兩面性，即N F ．K B 短暫的激活具有神經(jīng)保護作用，而持續(xù)的激活則可能損傷組裂1 4 ，”】。S h e n 等【l 6 】的實驗證實N F ．v ．B參與了腦缺血再灌注損傷，具有神經(jīng)保護作用。新近，我們也在大鼠腦缺血再灌注損傷模型發(fā)現(xiàn)D I P 能夠抑制C D 9 5 分子的表達。根據(jù)以上的預實驗結果我們提出，同T 淋巴細胞凋亡機制的產生一樣，轉錄

3、因子N F ．r ．B或／和C a Z + ／C a M K ．C a l c i n e u r i n - N F A T - C D 9 5 分子通路可能參與了腦缺血再灌注損傷。D I P 通過抑制L ．型鈣通道的鈣電流，調節(jié)N F ．1 ①的D N A 結合活性；抑制C a l c i n e u r i n 的活性和／或表達，或增強G S K ．3 的活性和／或表達；調節(jié)N F A T 的D N A 結合活性，從而抑制C D

4、9 5 分子誘導的細胞凋亡，發(fā)揮抗腦缺血再灌注損傷作用。為驗證我們上述的假說，本研究將采用免疫組織化學技術，流式細胞學技術，激光共聚焦顯微鏡及分子生物學技術等，利用大鼠腦缺血再灌注損傷模型評價：( 1 ) D I P 在在體腦缺血再灌注損傷中的作用；( 2 ) D I P 與死亡信號轉道通路之間的關系；( 3 ) 轉錄因子N F A T c 及N F ．，出在腦缺血再灌注損傷中的作用；( 4 ) C a l c i n e u r i

5、n ，G S K ．3 在腦缺血再灌注損傷中的作用，并探討D I P 的基因轉錄抑制功能。這些將對闡明D I P 抗腦缺血一再灌注損傷的分子機制提供重要的理論依據(jù)。1 ．D I P 在在體( i n v i v o ) 腦缺血再灌注損傷中的作用l O ～1 2 周齡，體重2 5 0 ～3 0 0 克S D 雌性大鼠，四血管阻斷法制備全腦缺血再灌注損傷模型( 缺血1 5r a i n ，再灌注三天) ，雙苯氟嗪( 2 0 m g &

6、; g ，4 0m g & g 和8 0 m g ／k g ) 灌胃給藥，每日一次。研究結果顯示：( 1 ) 共聚焦顯微鏡掃描技術( C o n f o c a l ) 觀察A O ／E B 雙瑩光染色海馬神經(jīng)元：假手術組以正常海馬神經(jīng)元( 核發(fā)黃綠色．黃色熒光，密度不均，呈結構樣特征) 居多，有少量早期凋亡的海馬神經(jīng)元( 核熒光亢進，呈均勻一致的綠色) ；溶劑組多見晚期凋亡的海馬神經(jīng)元( 核呈橙紅色，可見核的斷裂和濃縮) ；與