分子導(dǎo)向藥物IL-2-mTNFα的構(gòu)建、表達(dá)及活性測(cè)定.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、該論文采用PCR技術(shù)對(duì)人腫瘤壞死因子(TNFα)的cDNA進(jìn)行了改造,并連接到完整的人 IL-2基因3'末端,得到重組質(zhì)粒z3和z4,然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行溫控誘導(dǎo)表達(dá),得到了兩 種融合蛋白IL-2-TNF1和IL-2-TNF2.其中TNF1是將N端前8個(gè)氨基酸換成ThrProGlyValArgGlyProArg;TNF2是在N端第一位Val前生各增加3個(gè)氨基酸,成為T(mén)hrProGlyVal<,1>ArgGlyPro.兩種融合蛋白表達(dá)量分

2、別占菌體蛋白的26.1％和29.0％,再經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)的方法純化,得到純度分別為87.1％和91.7％的融合蛋白.體外實(shí)驗(yàn)表明,這兩種融合蛋白對(duì)活化的小鼠T細(xì)胞(IC50分別為0.129和0.094mg/ml)和L1210細(xì)胞(IC50分別為0.31和0.155mg/ml)有特異殺傷作用.對(duì)無(wú)IL-2受體的L 929細(xì)胞無(wú)殺作用.TNFα本身對(duì)L1210細(xì)胞無(wú)效.因此作者構(gòu)建的融合蛋白改變了TNFα的殺細(xì)胞譜,

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