蕨麻正丁醇部位對(duì)心肌細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究蕨麻正丁醇部位對(duì)體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。 方法：(1)取新生1～3d的SD大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)，采用MTT法檢測(cè)不同缺氧時(shí)間細(xì)胞的存活率、生化手段檢測(cè)培養(yǎng)基中乳酸脫氫酶(LDH)活性，以確定心肌細(xì)胞的最佳缺氧時(shí)間，建立心肌細(xì)胞缺氧損傷模型。(2)將搏動(dòng)狀態(tài)良好，生長(zhǎng)密度無(wú)明顯差異的心肌細(xì)胞隨機(jī)分為正常對(duì)照組、缺氧損傷模型組、蕨麻正丁醇部位高、中、低劑量(0.003g/ml、0.0015g/ml、0.0

2、0075g/ml)組(缺氧同時(shí)加入蕨麻正丁醇部位)、陽(yáng)性藥物丹參(0.003g/ml)組。缺氧6h后，通過(guò)細(xì)胞存活率、細(xì)胞活力、凋亡細(xì)胞數(shù)、HE染色、PI-Hoechst染色、總蛋白含量測(cè)定及生化指標(biāo)LDH、CK的檢測(cè)觀察不同劑量厥麻正丁醇部位對(duì)心肌細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用；通過(guò)檢測(cè)生化指標(biāo)SOD、MDA、NO、NOS；免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)caspase3、caspase9蛋白含量；RT-PCR技術(shù)檢測(cè)caspase3、caspase9基

3、因表達(dá)水平，探討其作用的可能機(jī)制。 結(jié)果：(1)心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變：倒置顯微鏡下，正常對(duì)照組心肌細(xì)胞從第三天起成簇生長(zhǎng)，搏動(dòng)明顯，細(xì)胞簇?cái)?shù)量增多，細(xì)胞形狀多樣化，呈圓形、梭形及錐形，并有枝芽狀突起，向細(xì)胞簇周圍呈放射狀生長(zhǎng)，折光性強(qiáng)。缺氧損傷后，胞體折光性下降，突起縮短或消失，搏動(dòng)減弱或消失，蕨麻正丁醇部位高劑量組心肌細(xì)胞形態(tài)較模型組明顯改善。(2)模型缺氧時(shí)間的確定：心肌細(xì)胞缺氧0～6h，細(xì)胞活性變化幅度最大，單位時(shí)間內(nèi)細(xì)胞明

4、顯減少，LDH的外漏量顯著增加(P<0.01)，將缺氧時(shí)間延長(zhǎng)至24h和48h，O.D值和LDH的外漏量無(wú)顯著變化，曲線趨于平坦，確定本實(shí)驗(yàn)中心肌細(xì)胞缺氧模型的缺氧時(shí)間為6h。(3)心肌細(xì)胞存活率：模型組(57.7％±3.9％)明顯低于正常組(94.1％±1.2％)(P<0.01)；厥麻正丁醇部位高劑量組(82.3％±4.1％)，厥麻正丁醇部位中劑量組(81.2％±3.8％)，厥麻正丁醇部位低劑量組(79.9％±4.0％)均明顯高于模型

5、組(P<0.01)。(4)心肌細(xì)胞活力：模型組(0.053±0.003)明顯低于正常組(0.315±0.012)(P<0.01)：厥麻正丁醇部位高劑量組(0.157±0.011)，厥麻正丁醇部位中劑量組(O.104±0.019)，厥麻正丁醇部位低劑量組(0.039±0.011)均明顯高于模型組(P<0.05或P<0.01)。(5)蕨麻正丁醇部位高劑量組可明顯降低缺氧損傷細(xì)胞凋亡的數(shù)量。(6)與正常組比較，模型組細(xì)胞蛋白總量明顯減少(P<

6、0.01)；厥麻正丁醇部位高劑量及中劑量組細(xì)胞損傷明顯改善，總蛋白量較模型組顯著增加(P<0.01)。(7)蕨麻正丁醇部位各劑量組均可顯著降低缺氧損傷心肌細(xì)胞LDH、CK的外漏量(P<0.01)；提高細(xì)胞內(nèi)SOD活性(P<0.01)；減少M(fèi)DA的產(chǎn)生(P<0.05)；升高NO含量(P<0.01)及NOS水平(P<0.05)。(8)厥麻正丁醇部位高劑量組可顯著降低caspase3、caspase9蛋白的表達(dá)(P<0.01)。(9)RT-P