肢體缺血預處理對心肌MAPK相關基因表達譜變化的影響.pdf

1、目的：應用全基因表達譜芯片技術分析肢體缺血預處理過程中心肌基因差異性表達，了解肢體缺血預處理對心肌MAPK相關基因表達譜變化的影響。
　　方法：采用隨機數字法，隨機分為兩組每組5只，肢體缺血預處理（limb ischemia preconditioning,LIP）組（LIP組）和空白組（C組）。LIP組用橡皮筋套住大鼠右后肢根部，缺血5 min，再灌注5 min，共3個循環(huán)。C組大鼠麻醉后僅進行假處理。觀察24h肢體缺血預處理后

2、24小時即LIP延遲相，分別取LIP組和C組的左心室的心尖部厚度在0.5㎝以下，重50-100㎎的組織，放于RNA保存液-80℃保存。提取總RNA進行擴增、3H-吲哚菁類染料（cyanine-3,Cy3）標記，與Agilent4x44K大鼠全基因組表達芯片雜交，熒光掃描，經基因本體（Gene Ontology，GO）分析、Pathway分析數據處理，篩選出MAPK信號通路的差異表達基因,用實時定量PCR分析驗證部分與MAPK信號通路相關

3、的差異表達基因，并結合通路分析來探索MAPK信號通路與肢體缺血預處理的內在聯(lián)系。
　　結果：芯片篩選結果顯示差異基因為倍數變化大于2倍（fold change cut-off≥2.0）有1364個。GO分析結果顯示，生物學過程（Biological Process,BP）中外界刺激在其差異表達基因中所占比例最大；分子功能(Molecular Function,MF)相關的差異基因中最多的是結合受體基因；細胞組分（Cellular

4、Component，CC）中細胞通道相關基因變化比較顯著。Pathway分析結果中顯示上調通路有10條；下調通路有10條，其在MAPK信號通路中，上調的基因有19個，下調的基因有15個。MAPK通路中Map3k6、Il1r2、Grb2、AKT和HSP變化倍數超過2倍，其Map3k6變化最顯著。RT-PCR驗證結果與芯片檢測的變化趨勢一致。
　　結論：以京都大學基因組和基因百科全書數據庫（Kyoto Encyclopedia of

5、Genes and Genomes，KEGG）為依據，對大鼠LIP延遲相心肌基因表達通路分析， LIP組與C組心肌基因表達存在多個上調和下調基因的差異；P38M APK信號通路中基因AKT、HSP在LIP延遲相對心肌作用起正向調控作用；ERK1/2信號通路中基因Grb2在LIP延遲相對心肌作用起正向調控作用；經典的MAPK信號通路中基因Il1r2在LIP延遲相對心肌作用起負向調控作用。即LIP延遲相對心肌作用過程中MAPK信號通路對起雙