遠距缺血預(yù)處理抑制大鼠缺血心肌肝細胞生長因子基因表達.pdf

1、目的：缺血預(yù)處理是目前知道的最強的具有確切心肌保護作用的一種方法，即反復(fù)短暫的缺血發(fā)作可以使心肌在后續(xù)的持續(xù)缺血中得到保護，從而減少急性心肌梗死(acutemyocardial infarction，AMI)的面積。其后人們發(fā)現(xiàn)小腸或腎臟缺血后可以對閉塞冠脈較長時間的心肌產(chǎn)生保護作用，能顯著縮小心肌梗死的面積。這種遠端器官缺血預(yù)處理對心肌的保護作用稱為遠距缺血預(yù)處理。其機制的探討對于預(yù)防和治療心肌梗死具有重要意義。目前研究認為，局部組織

2、短暫的缺血再灌注后，可以釋放內(nèi)源性物質(zhì)如腺苷、緩激肽、鈣基因相關(guān)肽、自由基等，這些物質(zhì)激活內(nèi)臟傳入神經(jīng)，通過神經(jīng)反射的調(diào)節(jié)，最后激活心肌的受體腺苷、緩激肽再激活第二信使蛋白激酶C以及K-ATP通道等來發(fā)揮心肌的保護作用。涉及預(yù)處理的內(nèi)源性物質(zhì)很多，但其確切機制仍不清楚。肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)是異二聚體雙鏈結(jié)構(gòu)，含有一個分子量69kd的α鏈和一個分子量34kd的β鏈，人的王HGF基因定位

3、于第7號染色體上。HGF與其受體C-met結(jié)合以后發(fā)揮作用，是來源于間質(zhì)細胞的一種促進細胞有絲分裂的多功能因子。它具有抗調(diào)亡，促血管新生，修復(fù)內(nèi)皮細胞的功能等作用。HGF作為一種心血管保護因素已試驗性應(yīng)用于缺血性心臟病的治療，但它是否參與了心肌缺血預(yù)處理還不清楚。本研究通過觀察大鼠心肌梗死和遠距缺血預(yù)處理后缺血心肌中HGF基因表達的變化，旨在探討HGF在遠距缺血預(yù)處理中的作用，為臨床防治缺血性心臟病提供理論依據(jù)。 方法：

4、 1.復(fù)制大鼠模型及實驗分組：①AMI組：采用大鼠心臟冠狀動脈左前降支(left anterior descending coronaryartery，LAD)結(jié)扎法制作急性心肌梗死模型。②下肢缺血預(yù)適應(yīng)組；動脈夾夾閉雙側(cè)股動脈5min后，再灌注5min，重復(fù)4次后結(jié)扎LAD復(fù)制AMI模型(操作同AMI組)。③腎缺血預(yù)適應(yīng)組：動脈夾夾閉雙側(cè)腎動脈5min后，再灌注5min，重復(fù)3次后結(jié)扎LAD復(fù)制AMI模型(操作同AMI組)。④正常對照

5、組：取正常大鼠心肌作為對照。除④組外余各組均在結(jié)扎LAD后1h、2 h、4h、6h、12h處死大鼠取材。 2.實驗指標的觀察：①觀察心電圖：結(jié)扎大鼠LAD后，以心電圖ST段持續(xù)抬高20min作為AMI模型制作成功標志。以動脈夾夾閉腎動脈后雙腎顏色變暗，夾閉股動脈后雙下肢顏色青紫分別作為腎缺血預(yù)處理組、下肢缺血預(yù)處理模型復(fù)制成功標志。②心肌梗死程度：①②③組均在結(jié)扎LAD后12h處死大鼠，用evans-TTC染色法區(qū)分梗死區(qū)和缺血

6、區(qū)心肌，切取梗死區(qū)心肌及缺血區(qū)心肌并稱重。以梗死心肌與缺血心肌和梗死心肌重量之和的百分比來表示梗死程度，以缺血區(qū)心肌重量占左心室心肌重量百分比來表示心肌缺血程度。③缺血區(qū)心肌HGF基因表達：留取各組各時間點缺血區(qū)心肌，用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測大鼠缺血區(qū)心肌HGF mRNA表達，用β-actin引物做內(nèi)參照，HGF擴增產(chǎn)物與β-actin擴增產(chǎn)物密度掃描之比作為HGF的相對表達量。以上所得數(shù)據(jù)均用SPSS13.0進行單因

7、素方差分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1.模型復(fù)制成功：結(jié)扎大鼠LAD后，心電圖顯示ST段明顯抬高，AMI模型復(fù)制成功。用動脈夾夾閉腎動脈后可見雙腎顏色蒼白，用動脈夾夾閉股動脈后可見雙下肢顏色蒼白，提示腎缺血預(yù)處理，下肢缺血預(yù)處理模型復(fù)制成功。 2.梗死程度：心肌組織經(jīng)evans-TTC染色后，正常心肌為藍色，缺血區(qū)心肌為磚紅色，梗死區(qū)心肌為蒼白色。腎缺血預(yù)處理組，下肢缺血預(yù)處理組較急性心肌梗死組相

8、比其缺血程度無明顯差異(P>0.05)；而腎缺血預(yù)處理組心肌梗死程度(46.18％±6.15％)、下肢缺血預(yù)處理組梗死程度(46.92％±6.69％)較急性心肌梗死組(66.44％±13.68％)相比均降低大約30％，降低有明顯差異(P<0.05)。腎缺血預(yù)處理組，下肢缺血預(yù)處理組梗死程度相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 3.缺血區(qū)心肌HGF的基因表達急性心梗組隨時間延長HGF mRNA表達(1h：0.52±0.12；2h

9、：0.56±0.18；4h：0.61±0.16；6h：0.68±0.11；12h：0.71±0.18、)逐漸上升，較正常對照組(0.47±0.11)相比4h、6h、12h升高有明顯差異(P<0.05)；腎缺血預(yù)處理組各時間點(2h：0.46±0.15:4h：0.31±0.06；6h：0.35±0.08；12h：0.31±0.06、)及下肢缺血預(yù)處理組各時間點HGF mRNA表達(2h：0.47±0.07；4h：0.40±0.08；6h：

10、0.47±0.17；12h：0.41±0.11)較急性心梗組各時間點相比4h、6h、12h均降低，降低有顯著差異(P<0.01)。 結(jié)論： 1.遠距缺血預(yù)處理可以顯著降低心肌梗死的面積，保護心肌少受缺血的損害，遠距缺血預(yù)處理的研究有可能為預(yù)防和治療心肌梗死提供一種新的有效的方法。 2.遠距缺血預(yù)處理抑制了缺血區(qū)心肌HGF的基因表達，提示HGF不僅參與了急性心肌缺血的發(fā)病，而且可能是遠距缺血預(yù)處理減少梗死面積的機制