心力康合劑含藥血清對大鼠心肌細胞肥大影響的研究.pdf

1、腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)過度活躍在多種心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用,血管緊張素Ⅱ作為重要的生長促進因子,對多種組織、細胞的生長具有促進作用,是刺激心肌肥厚的主要因素之一.本課題通過乳鼠心肌細胞的原代培養(yǎng),比較血管緊張素Ⅱ刺激前后培養(yǎng)的心肌細胞周期分布改變情況,研究血管緊張素Ⅱ對心肌細胞生長的影響模式,同時分別從信號轉導、核轉錄因子表達、細胞內DNA、總蛋白合成、凋亡等方面研究心力康合劑含藥血清對AngⅡ誘導的心肌細胞肥大的影

2、響,以探討該藥物安全性及其作用機制.方法:通過對腹主動脈縮窄致心肌肥厚大鼠灌服心力康合劑,制備心力康含藥血清,薄層色譜法檢測所取大鼠血清;應用胰蛋白酶和膠原酶聯(lián)合分段消化法分離心肌細胞,采取差速貼壁的方法對心肌細胞進行純化,原代培養(yǎng),建立細胞模型;免疫細胞化學技術進行α-Sarcomeric actin染色,鑒定心肌細胞純度;MTT法結合倒置相差顯微鏡分析心力康含藥血清對心肌細胞的細胞毒作用;流式細胞術檢測心肌細胞周期分布、細胞內DNA

3、合成及凋亡百分率;免疫細胞化學檢測核轉錄因子c-Jun蛋白、凋亡相關基因Bcl-2及Bax表達水平;放免法檢測細胞內心鈉素合成、分泌情況.結論:使用血管緊張素Ⅱ能顯著促進乳鼠心肌細胞G0/G<,1>、G<,2>/M期DNA合成,增加細胞內總蛋白含量,單純血管緊張素Ⅱ刺激可以誘導心肌細胞發(fā)生肥大反應,包括:細胞的體積增大,蛋白和DNA的合成增加;胚胎基因心鈉素及原癌基因c-Jun蛋白表達增加;在無外源性過度生長刺激存在的條件下,心力康合劑