苦參堿對液氮保存人肝細胞的保護作用的實驗研究.pdf

1、終末期肝病患者需要生物人工肝來維持生命。而生物人工肝主要包括肝細胞、生物反應器和體外血漿灌注三部分。其中，肝細胞是HBAL的主要生物成分，在HBAL中起核心作用，HBAL的支持作用主要來源于肝細胞的生物代謝功能。目前肝細胞來源有異種動物的肝細胞、肝干細胞、轉(zhuǎn)基因肝細胞、永生化肝細胞株、人肝細胞。其中動物來源細胞可能有病毒感染的危險；肝干細胞還處于研究起步階段，目前用于BAL的條件尚未成熟；轉(zhuǎn)基因肝細胞制備技術要求高，尋找合適的基因的問題

2、還未解決。而人肝細胞安全性好，細胞生物學功能相同，特別是能夠提供同源的生物活性物質(zhì)，如白蛋白、肝細胞再生因子、凝血因子等，這些是其他細胞材料不具備的，故是目前生物人工肝的理想細胞材料。人肝細胞系有易獲得、形態(tài)一致、功能穩(wěn)定等優(yōu)點，且分泌的白蛋白等物質(zhì)與人體內(nèi)的物質(zhì)結構一致，也是生物人工肝生物材料的潛在來源。 制備一個具有相似功能的生物人工肝需要約200g肝細胞。臨床使用的生物反應器內(nèi)，細胞數(shù)量至少應該達到15％的人肝細胞數(shù)量，即

3、約109個數(shù)量級才有臨床意義。解決大量肝細胞需求問題傳統(tǒng)上采取傳代培養(yǎng)及用特殊材料為載體進行高密度培養(yǎng)方法，但其工作量大、易污染、費用高、對環(huán)境要求高，而且肝細胞經(jīng)多次傳代后，其活性、功能降低。肝細胞凍存可以克服以上肝細胞培養(yǎng)中的各種缺點，是解決大量肝細胞來源的重要方法。對凍存而言，國內(nèi)外多采用分階段降溫，快速復溫的方法；但對凍存保護劑(CPA)的濃度、凍存液的組成及保存時間等報道不一。凍存保護劑是肝細胞凍存的核心。臨床上用以對肝臟疾病

4、進行護肝治療，且體外實驗證實苦參堿對肝細胞有抗損傷和改善肝細胞分泌蛋白作用?？鄥A對肝細胞凍存過程有無保護作用，與DMSO等凍存保護劑有無協(xié)同作用，以及與其他性質(zhì)的保護劑聯(lián)合使用時有何聯(lián)系呢?針對以上問題目前國內(nèi)外尚未見研究報道，本實驗設計對苦參堿影響人胎肝細胞和L-02人肝細胞超低溫保存的多種因素，包括低溫保存時保護劑的搭配的選擇及其濃度的合理使用方案等進行了探討。 第一部分：苦參堿對人胎肝細胞液氮保存的影響 目的：了

5、解苦參堿對人胎肝細胞液氮凍存復蘇后功能的影響，探索一種改善人肝細胞凍存的新方法。 結論： (1)苦參堿對人胎肝細胞液氮凍存有保護作用，6mg/L苦參堿是最好的濃度； (2)苦參堿與二甲基亞砜聯(lián)合使用降低了凍存保護劑二甲基亞砜(DMSO)的濃度，表明兩者有協(xié)同作用。 第二部分：苦參堿對L-02人肝細胞系液氮保存的影響 目的：了解不同濃度劑量苦參堿與凍存保護劑聯(lián)用對L-02人肝細胞系液氮凍存復蘇后功能