姜黃素抑制K562細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 觀(guān)察姜黃素誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞株K562凋亡作用及其細(xì)胞周期的變化,同時(shí)觀(guān)察其對(duì)凋亡相關(guān)基因BCL-XL和BAK表達(dá)的影響。探討姜黃素抑制人白血病細(xì)胞K562生長(zhǎng)并誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制,指導(dǎo)臨床白血病的化學(xué)藥物治療。
　　 材料與方法
　　 1細(xì)胞培養(yǎng)
　　 以人類(lèi)白血病細(xì)胞株K562為研究對(duì)象。將K562細(xì)胞置于體積分?jǐn)?shù)為10％的新生胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中,37℃、5％二氧化碳孵箱中培

2、養(yǎng):取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,0.4％臺(tái)盼藍(lán)染色,細(xì)胞活性在98％以上,調(diào)整細(xì)胞密度為1×106個(gè)/mL,0.9ml/孔接種于24孔板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
　　 2實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
　　 將對(duì)照組和經(jīng)10umol/L、30umol/L、50umol/L、100umol/L的姜黃素干預(yù)的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞于24h和48h后分別收集起來(lái),用流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率和細(xì)胞周期的變化,RT-PCR方法檢測(cè)BCL-XL和BAK的mRNA的表達(dá)變化,免疫組化法檢測(cè)BCL

3、-XL和BAK蛋白的表達(dá)。
　　 3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后采用單因素方差分析,以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 姜黃素可以對(duì)K562細(xì)胞有較明顯的增殖抑制作用,且呈劑量依賴(lài)與時(shí)間依賴(lài),流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示姜黃素濃度在100μM時(shí)作用24小時(shí)后,凋亡率為(58.53±1.08)％,對(duì)照組凋亡率為(1.12±0.2

4、0)％,與對(duì)照組相比明顯增高(P<0.05)；姜黃素濃度在100μM時(shí)作用48小時(shí)后,凋亡率為(84.70±1.53)％,對(duì)照組凋亡率為(1.25±0.19)％,與對(duì)照組相比明顯增高(P<0.05)；隨著姜黃素濃度增加,作用于K562細(xì)胞后可以使其倍增時(shí)間明顯延長(zhǎng),G1期細(xì)胞增多,S期細(xì)胞減少；RT-PCR結(jié)果顯示姜黃素能下調(diào)K562細(xì)胞BCL-XL mRNA的表達(dá),上調(diào)BAKmRNA的表達(dá)(P<0.05),免疫組化法發(fā)現(xiàn)姜黃素可以降低