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文檔簡介
1、目的:探討過度內質網(wǎng)應激在大鼠慢性環(huán)孢素A(Cy-closporine A,CsA)腎毒性模型細胞凋亡中的作用機制。
方法:將Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機分為正常對照組和慢性CsA腎毒性組,分別給予皮下注射橄欖油(1mL/kg/d,對照組)和CsA(15mg/kg/d,毒性組)1周及4周后處死大鼠。通過末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP缺口末端標記測定法(TUNEL染色法)及 Masson染色評估腎小管間質纖維
2、化和細胞凋亡;使用免疫組化學染色和免疫印跡依次檢測分子免疫球蛋白結合蛋白(Bip)、磷酸化的真核細胞翻譯起始因子2α(elF2α)、生長抑制DNA損傷基因153(GADD153)、細胞凋亡相關基因caspase-12及caspase-3蛋白表達。
結果:與對照組比較,CsA注射1周觀察不到腎小管間質纖維化和TUNEL陽性細胞,而給予 CsA注射4周大鼠表現(xiàn)為明顯的腎小管間質纖維化[(38.9±3.3)%vs.(0.0±0.0)
3、%,P<0.01]和大量 TUNEL陽性細胞[(89±9)% vs.(7±2)%,P<0.01]。在分子水平上,與對照組比較,CsA注射組Bip和caspase-12蛋白的表達1周達到高峰,4周后降至正常水平;反之,elF2α、GADD153、caspase-3蛋白表達呈時間依賴性的增加。
結論:在慢性CsA腎毒性中,過度的內質網(wǎng)應激耗盡Bip,凋亡前途徑中elF2α、GADD153、caspase-12,caspase-3的
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