ROS介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在氟致神經(jīng)干細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：氟引起的發(fā)育神經(jīng)毒性近年來受到廣泛關(guān)注，但其毒作用機制尚未完全闡明。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，一定劑量的氟化鈉（NaF）可抑制小鼠源性神經(jīng)干細(xì)胞株C17.2增殖并促進細(xì)胞凋亡，同時伴隨著氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生。本研究擬采用緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的化學(xué)伴侶4-苯基丁酸（4-PBA）和抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（NAC）對氟染毒進行干預(yù)，旨在明確內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在氟致神經(jīng)干細(xì)胞凋亡中的作用及氧化應(yīng)激所扮演的角色，為進一步闡明氟神經(jīng)毒性作用機制提供理論依據(jù)

2、。
　　方法：根據(jù)前期研究結(jié)果，選取60mg/L NaF對體外培養(yǎng)的C17.2細(xì)胞進行染毒處理，采用2mmol/L4-PBA或1mmol/L NAC分別進行干預(yù)。染毒24h后，利用Hoechst染色檢測凋亡細(xì)胞核形態(tài)改變、western blot檢測凋亡蛋白Caspase-3酶原以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、IRE1和CHOP的表達水平，并采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞ROS水平。
　　結(jié)果：與60mg/L NaF染毒組相比，4

3、-PBA干預(yù)可明顯降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白IRE1和CHOP的表達水平，并抑制Caspase3酶原剪切活化，減少C17.2細(xì)胞凋亡，提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路參與氟致C17.2細(xì)胞凋亡；此外，與60mg/L NaF染毒組相比，NAC干預(yù)不僅使細(xì)胞ROS水平顯著降低，還能抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白IRE1和CHOP的表達，并減輕其介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，表明ROS可能通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑調(diào)控氟誘導(dǎo)的神經(jīng)干細(xì)胞凋亡
　　結(jié)論：ROS可作為上游信號分子通過