小檗堿抑制HCT116細胞增殖與Wnt-β-catenin信號的關系研究.pdf

1、實驗目的:
　　 研究小檗堿抑制結腸癌HCT116細胞增殖與Wnt/β-catenin信號之間的關系及可能機制。
　　 實驗方法:
　　 采用結晶紫染色、免疫熒光、流式細胞術、RT-PCR、Western blot、報告質(zhì)粒等技術，研究小檗堿抑制HCT116細胞增殖與Wnt/β-catenin信號之間的關系及其可能的機制。具體方法如下:
　　 1.分別采用結晶紫染色、免疫熒光、流式細胞術，檢測小檗堿對結腸

2、癌細胞HCT116增殖、凋亡和周期的影響。
　　 2.利用熒光素酶報告質(zhì)粒，檢測小檗堿對HCT116細胞Wnt/β-catenin信號轉導的影響。
　　 3.通過Western blot檢測，小檗堿對HCT116細胞總蛋白和胞漿/核蛋白中β-catenin蛋白水平以及Wnt下游目的基因表達的影響。
　　 4.利用重組腺病毒技術，檢測在過表達及沉默表達β-catenin的情況下，小檗堿對HCT116細胞增殖的影響。

3、
　　 5.采用LiCl抑制GSK3β，檢測小檗堿對HCT116細胞增殖及細胞胞漿/核蛋白中β-catenin水平的影響。
　　 6.采用RT-PCR方法，檢測小檗堿對HCT116細胞β-catenin表達的影響。
　　 實驗結果:
　　 1.小檗堿抑制HCT116細胞增殖，誘導其凋亡，并促使細胞發(fā)生G1期周期阻滯。
　　 2.小檗堿抑制Wnt/β-catenin信號通路信號轉導活性。
　　

4、 3.小檗堿降低HCT116細胞總蛋白和胞漿/核蛋白中β-catenin蛋白水平，以及下游目的基因的表達。
　　 4.外源性過表達β-catenin減弱小檗堿對HCT116增殖的抑制作用，而沉默表達β-catenin能加強小檗堿對HCT116增殖的抑制作用。
　　 5.GSK3β抑制劑LiCl不能逆轉小檗堿對HCT116增殖的抑制作用以及胞漿/核蛋白中β-catenin蛋白水平的降低。
　　 6.小檗堿明顯抑制