藍光照射致人視網(wǎng)膜色素上皮細胞凋亡與Ca2+-PKC信號通路的相關性研究.pdf

1、目的：探討藍光照射誘導人視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)細胞凋亡的分子機制，研究在此過程中Ca2+-PKC信號通路所起的作用。
　　 方法：分別用不同濃度的蛋白激酶C(protein kinase C)激動劑PMA和抑制劑Calphostin C預處理體外培養(yǎng)的第四代人RPE細胞；用Western bloting法檢測PKC蛋白表達，確定PMA與Calphostin C影響PKC活性

2、的最適宜濃度。將體外培養(yǎng)的第四代人RPE細胞隨機分為2組：A組：藍光光照組，用(2000±500)Lux藍光照射6h，終止培養(yǎng)24h；B組：無光照組。用非放射性核素法測定無光照組與藍光光照組PKC活性變化。將體外培養(yǎng)的第四代人RPE細胞隨機分為5個干預組：A組：無光照組：B組：單純藍光光照組；C組：藍光+硝苯地平組；D組：藍光+CalphostinC組；E組：藍光+PMA組；用Fluo-3 AM標記人RPE細胞，用激光共聚焦顯微鏡(LS

3、CM)測定各組細胞內(nèi)Ca2+熒光強度。
　　 結(jié)果：(1)PMA組：100nmol/L組和200nmol/L組PKC活性均高于其它各組，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000)，100nmol/L組與200nmol/L組相比PKC活性無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.072)；Calphostin C組：100nmol/L組和200nmol/L組P

4、KC活性均低于其它各組，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000，0.000)，100nmol/L組與200nmol/L組相比PKC活性無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.385)。(2)藍光光照組PKC活性高于無光照組，差異有統(tǒng)計學意義(T=8.136，P=0.015)。(3)藍光光照組、藍光+硝苯地平組、藍光+Calphostin C組和藍光+PMA組細胞內(nèi)Ca2+熒

5、光強度值均高于無光照組，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000，0.000，0.000，0.000)；藍光+硝苯地平組、藍光+Calphostin C組細胞內(nèi)Ca2+熒光強度值均低于藍光光照組，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000，0.000)；藍光+硝苯地平組細胞內(nèi)Ca2+熒光強度值低于藍光+Calphostin C組，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)；藍光+Calphostin C組細胞內(nèi)Ca2+熒光強度值低于藍光+PMA組，差異有統(tǒng)計學意

6、義(P=0.000)；藍光光照組細胞內(nèi)Ca2+熒光強度值低于藍光+PMA組，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000)。
　　 結(jié)論：(1)PMA和Calphostin C影響PKC活性的最適宜濃度均為100nmol/L；(2)藍光照射后人RPE細胞內(nèi)PKC活性增高；(3)藍光照射后人RPE細胞內(nèi)鈣離子濃度增高，胞內(nèi)增高的鈣離子可能來源于鈣通道及Ca2+-PKC信號通路；鈣通道抑制劑硝苯地平和PKC抑制劑Calphostin C均能使藍