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文檔簡介
1、目的 了解不同免疫抑制劑對于血管平滑肌細胞(VSMC)和移植腎組織中TGF-β1和Smads信號傳導系統(tǒng)的影響機制及其臨床意義。方法(1)大鼠胸主動脈VSMC體外原代培養(yǎng),以空白處理為對照組,實驗組分別用CsA(3μg/m1)、FK506(1μg/m1)、MMF(0.3μg/m1)和RPM(10μg/m1)給予干預,分別處理6h和12h后收取標本。采用免疫組化和實時熒光定量PCR檢測各組各時相標本中TGF-β1、Smads蛋白和mRNA
2、在VSMC中的定位及表達。(2)建立SD→Wistar大鼠強化缺血再灌注損傷移植腎加速慢性排斥模型。實驗分為6組:假手術組、對照組、(CsA6mg/(kg.d))組、FK506(0.15mg/(kg.d))組、MMF(20mg/(kg.d))組、RPM(0.8mg/(kg.d))組,每組每個時間點動物為8只。除假手術組外的其它各組動物于原位腎移植后當天即開始使用CsA10mg/(kg.d)×10d,以避免急性排異反應,10d后各實驗組開
3、始應用不同免疫抑制劑進行干預處理直至相應時間點。分別于術后4、8及12W時處死實驗動物,采用免疫組化和實時熒光定量PCR檢測TGF-β1、Smads蛋白和mRNA在腎臟中的定位及表達。 結果免疫組化顯示TGF-β1、Smad2和Smad7主要定位于VSMC的細胞漿和細胞膜,在細胞核亦有少許表達。在移植腎組織中TGF-β1主要定位于腎小球、腎小管和間質(zhì)細胞的細胞膜、細胞漿和細胞核;Smad7主要定位于腎小管和腎小球細胞的細胞漿,間
4、質(zhì)中也有表達;Smad2主要定位于腎小管細胞的細胞漿,腎小球和間質(zhì)也有表達。與對照組相比各實驗組的TGF-β1和Smad2表達均增高,而Smad7表達均降低。在處理后12h的VSMC和和移植后8W、12W的移植腎標本中,CsA組、FK506組TGF-β1、Smad2的蛋白和mRNA表達明顯高于對照組,Smad7的表達則明顯低于對照組,其差異有顯著性,P<0.05;RPM組和MMF組TGF-β1、Smad2的表達低于對照組、CsA組和FK
5、506組,而Smad7的表達則高于對照組、CsA組和FK506組,差異亦有顯著性,P<0.05。CsA組與FK506,MMF組與RPM組相比差異無統(tǒng)計學意義。 結論(1)免疫抑制劑可影響VSMC和慢性移植腎腎病組織中TGF-β1信號通路,其主要機理是通過改變受體激活型Smads和抑制型Smads的表達和功能狀態(tài)所致;(2)CsA、FK506可導致慢性移植腎腎病,其可能的機制是上調(diào)Smad2的表達和下調(diào)Smad7的表達,引起TGF
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