雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）結(jié)構(gòu)蛋白基因的克隆、表達(dá)及應(yīng)用研究.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(IB)是由傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病，已成為養(yǎng)雞業(yè)中危害最大的病毒性傳染病之一。IBV不具有血凝性，因此無(wú)法利用血凝抑制試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)感染或免疫后動(dòng)物體內(nèi)IBV抗體。雞體內(nèi)IBV抗體的檢測(cè)具有以下作用：1、對(duì)雞體內(nèi)IBV母源抗體的檢測(cè)可以為確定適當(dāng)?shù)拿庖邥r(shí)間提供依據(jù)；2、對(duì)免疫后雞群血清IBV抗體水平檢測(cè)可以評(píng)估免疫效果；3、對(duì)雞血清IBV抗體水平的檢測(cè)也可以作為IB診斷的輔助手段。有報(bào)道

2、利用氣管環(huán)中和試驗(yàn)檢測(cè)IBV抗體，但該試驗(yàn)費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，難以廣泛推廣。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)以其敏感、客觀、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，在傳染病的診斷、抗體檢測(cè)等方面得到了廣泛地運(yùn)用。目前，國(guó)外已有商品化的IBV抗體檢測(cè)試劑盒，但該試劑盒是以滅活I(lǐng)BV為包被抗原，需要大量地培養(yǎng)IBV病毒，存在散毒的潛在危險(xiǎn)，而且有關(guān)的IBV純化試驗(yàn)表明，IBV在離心純化過(guò)程中，病毒粒子容易破碎，冠極易丟失，不易得到完整的IBV病毒抗原。為解決以上問(wèn)題，本實(shí)驗(yàn)

3、設(shè)計(jì)通過(guò)基因工程方法表達(dá)病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因，利用重組結(jié)構(gòu)蛋白代替全病毒作為ELISA檢測(cè)包被抗原，建立檢測(cè)IBV血清IgG抗體和眼淚IgA抗體的方法，為檢測(cè)IBV抗體提供依據(jù)。 1.克隆了IBVM41毒株N基因和IBVH52毒株S1基因，對(duì)它們進(jìn)行了序列測(cè)定和與GenBank中收錄的IBVN基因、S1基因序列進(jìn)行了比較分析，并用ClustalX和Mega軟件將N基因、S1基因與公布的標(biāo)準(zhǔn)序列做同源性比較和系統(tǒng)進(jìn)化分析。 2

4、.在原核系統(tǒng)中表達(dá)了IBVN結(jié)構(gòu)蛋白基因和S1結(jié)構(gòu)蛋白基因的一個(gè)抗原表位片斷基因，并利用純化得到的重組蛋白建立間接ELISA方法，對(duì)雛雞血清和眼淚中的母抗和對(duì)人工感染IBVM41雛雞血清和眼淚中的抗體進(jìn)行了檢測(cè)，通過(guò)相關(guān)性分析，表明重組N蛋白是理想的檢測(cè)用抗原，具有較好的特異性和敏感性，S1多肽的一個(gè)片斷也可做檢測(cè)用抗原，但特異性較差。 3.許多病原體通過(guò)胃腸道、呼吸道、泌尿生殖道粘膜侵入動(dòng)物機(jī)體，因此，有效的粘膜免疫在抵抗這類(lèi)