GC誘導(dǎo)TSC表型改變對胸腺細(xì)胞分化的影響及YGW的逆轉(zhuǎn)作用.pdf

1、目的： 觀察糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)胸腺基質(zhì)細(xì)胞和胸腺樹突狀細(xì)胞表型的改變及其對胸腺細(xì)胞分化發(fā)育的影響，探討右歸丸對GC誘導(dǎo)TSC表型變化的調(diào)節(jié)作用機(jī)制和療效物質(zhì)基礎(chǔ)。為補陽類中藥有效用于防治激素所造成的胸腺損傷提供科學(xué)的實驗依據(jù)。 方法： 1.應(yīng)用GC建立BALB/c小鼠的胸腺損傷模型，觀察GC對小鼠胸腺指數(shù)、胸腺細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)的損傷作用。 2.RT-PCR或Real-timePCR法檢測處理小鼠胸腺細(xì)胞ICAM-

2、1、LFA-1、CD40、CD44、IL-7和TSLP等分子的基因表達(dá)水平 3.采用流式細(xì)胞術(shù)分析處理小鼠TSC表面MHCⅠ、MHCⅡ分子的表達(dá)狀念及其胸腺DC表型的改變。 4.采用流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR檢測右歸丸對小鼠TSC和DC表型的直接影響。 5.采用以上方法觀察右歸丸與GC同步處理小鼠，TSC、DC表型改變和胸腺細(xì)胞分化狀態(tài)。 6.統(tǒng)計方法：所有的實驗數(shù)據(jù)均用SPSS11.5軟件作統(tǒng)計學(xué)分析。

3、 結(jié)果： 1.GC誘導(dǎo)小鼠胸腺損傷的劑量依賴性 GC可顯著降低小鼠胸腺指數(shù)和胸腺細(xì)胞數(shù)，其抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性。隨著GC劑量的增大，胸腺指數(shù)由正常組的0.16％降至0.05％，(p＜0.01)；胸腺細(xì)胞數(shù)由15.88×106降至3.06×106，(p＜0.01)。 2.GC下調(diào)小鼠TSC表面分子的基因表達(dá) 粘附分子ICAM-1、LFA-1的相對表達(dá)量隨GC用量的增大(5mg/kg，10mg/kg，

4、20mg/kg)逐漸降低。Real-timePCR顯示IL-7也被顯著降低。 3.GC對小鼠TSC表型的影響 流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：與正常對照組相比，GC(10mg/kg)處理小鼠MHCⅡ+TSC的比例顯著下降(31.50％VS45.70％，p＜0.05)；同時胸腺細(xì)胞中DC細(xì)胞的比例(2.4％VS1.6％，p＜0.05)和MHCⅡ分子表達(dá)能力(79％VS61％，p＜0.01)也顯著降低。隨著GC對胸腺細(xì)胞總數(shù)的下調(diào)，GC

5、對TSC及DC表型的損傷作用更為突出。 4.右歸丸對正常小鼠胸腺TSC表面分子的促進(jìn)作用 YGW(20g/kg，30g/kg)能顯著升高胸腺指數(shù)(0.18％VS0.12％，0.17％VS0.12％，P＜0.05)和胸腺細(xì)胞數(shù)(36.84×106VS28.81×106，30.92VS28.81×106，P＜0.05)。 PCR結(jié)果顯示：右歸丸(20～30g/kg)可提高TSC的ICAM-1、LFA-1基因表達(dá)。流式

6、細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示：右歸丸(20g/kg，30g/kg)能顯著升高胸腺DC細(xì)胞數(shù)量(1.25×106VS0.5×106，1.0×106VS0.5×106，p＜0.01)和表達(dá)MHCⅡ分子的能力。 5.右歸丸對GC誘導(dǎo)的TSC表型改變的逆轉(zhuǎn)效應(yīng) 右歸丸(20g/kg，30g/kg)能明顯緩解GC誘導(dǎo)的胸腺指數(shù)的下降和胸腺細(xì)胞數(shù)的減少(p＜0.05)。 PCR結(jié)果顯示：GC與右歸丸的同步處理，可明顯改善GC誘導(dǎo)的胸腺

7、ICAM-1、LFA-1的低表達(dá)狀態(tài)，其中大劑量右歸丸(30g/kg)可使ICAM-1、LFA-1的表達(dá)恢復(fù)到正常水平。 流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示：右歸丸對GC誘導(dǎo)的小鼠胸腺MHCⅡ+TSC細(xì)胞數(shù)量的下調(diào)有逆轉(zhuǎn)作用(4～5.7×106VS1.9×106，p＜0.01)。 6.右歸丸對GC誘導(dǎo)的胸腺DC表型改變的保護(hù)效應(yīng) 與GC組相比，GC+YGW能明顯上調(diào)GC導(dǎo)致的MHCⅡ+TDC比例下降狀態(tài)，由57％升至79％(

8、P＜0.01)。 7.右歸丸對GC誘導(dǎo)的胸腺細(xì)胞異常分化的保護(hù)作用 伴隨著右歸丸對激素誘導(dǎo)的TSC表型改變的保護(hù)作用，與GC組相比，胸腺T細(xì)胞各亞群細(xì)胞的數(shù)量，均有不同程度的升高。尤其是對GC敏感的雙陽性T細(xì)胞。 8.右歸丸單體成分梓醇、烏頭堿對小鼠TSC及DC細(xì)胞表型的影響 梓醇(5mg/kg)能有效提高胸腺指數(shù)和胸腺細(xì)胞數(shù)，同時顯著降低MHCⅠ+TSC細(xì)胞的比例(92％VS44％)和數(shù)量(6.9×10

9、7VS3.2×107，p＜0.001)、以及MHCⅠ+TDC細(xì)胞的比例(96％VS78％)和數(shù)量(0.16×107VS0.11×107，p＜0.05)，對于MHCⅡ+TSC的比例及MHCⅠ+TDC細(xì)胞比例均沒有顯著影響。提示梓醇對胸腺的保護(hù)作用主要通過抑制TSC細(xì)胞MHCⅠ類分子高表達(dá)實現(xiàn)的。 烏頭堿(3μg/kg)能顯著升高小鼠胸腺MHCⅡ+TSC細(xì)胞的比例(38％VS64％，p＜0.001)和數(shù)量(3.4×107VS6×10