去骨瓣減壓對大鼠液壓沖擊腦損傷神經(jīng)凋亡及其調控機制的影響.pdf

1、目的:觀察去骨瓣減壓術對大鼠液壓沖擊腦損傷Nrf2蛋白表達、神經(jīng)細胞凋亡及其相關調控因子caspase-3和caspase-12表達的影響，探討去骨瓣減壓術在液壓沖擊腦損傷中發(fā)揮抗凋亡作用的機制。
　　方法:成年、雄性SD大鼠24只，體重350g±50g(約9周齡)，隨機分為3個組:假手術組（sham組）、腦損傷復骨瓣組(DC-組)和腦損傷去骨瓣減壓組（DC+組），每組各8只。sham組常規(guī)麻醉開顱，剪開硬膜，但不行液壓沖擊;后兩

2、組均常規(guī)麻醉，頭顱開骨窗，行液壓沖擊腦損傷，并剪開硬膜，其中DC-組開骨窗打擊后，放回原骨瓣，并用牙科丙烯酸水泥粘合固定，縫合頭皮切口; DC+組開骨窗打擊后20分鐘內用骨鉗從冠狀縫向菱形縫方向擴展咬開5mm，使骨窗的內側和外側分別是矢狀縫和上顳線，取出的骨瓣不再放回，縫合頭皮切口。
　　所有動物術后24h進行神經(jīng)系統(tǒng)功能評分，并過度麻醉、斷頭處死，開顱取腦，從損傷區(qū)前緣取大約100mg腦組織應用干濕重法測腦組織含水量;經(jīng)損傷區(qū)切

3、成約3-4mm厚冠狀腦組織片，多聚甲醛固定，HE染色行組織學觀察，免疫組織化學染色方法檢測Nrf2、caspase-3和caspase-12蛋白表達變化，原位末端標記法（TUNEL）檢測神經(jīng)細胞凋亡情況;將損傷區(qū)域后緣腦組織迅速置于液氮中，用Western Blot方法檢測Nrf2核蛋白、caspase-3蛋白和caspase-12蛋白含量。
　　結果:
　　1神經(jīng)系統(tǒng)功能評分
　　與sham組相比較， DC+組在術后

4、24h神經(jīng)功能評分較低(4.13±0.641)，DC-組在術后24h神經(jīng)功能評分也較低(2.25±0.707)，但DC+組在傷后24h神經(jīng)功能評分比DC-組高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2組織學觀察
　　與sham組相比，DC-組和DC+組動物挫傷灶周腦組織24h見細胞水腫明顯，體積明顯增大，細胞核膨大，胞漿淡染，局部呈現(xiàn)空泡樣變，周圍伴隨膠質細胞增生，但DC-組比DC+組更明顯。而sham組細胞胞體完整，胞

5、核清晰，胞漿均勻，大小均勻適中。
　　3大鼠腦組織含水量檢測
　　與sham組對比，DC+組在傷后24h腦組織含水量明顯升高(80.638±0.602)，DC-組在傷后24h腦組織含水量亦明顯升高(83.203±0.434)，但DC+組明顯低于DC-組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　4 Nrf2、Caspase-3和Caspase-12的免疫組織化學檢測
　　Nrf2蛋白表達:主要表達于神經(jīng)元細胞和神

6、經(jīng)膠質細胞的細胞核，在正常腦組織中表達為陰性或弱陽性。sham組Nrf2蛋白表達量很少。與sham組比較，后兩組神經(jīng)元、膠質細胞胞核中Nrf2的表達明顯增高，但DC+組（42.120±5.333）明顯高于DC-組(28.036±4.662)，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　Caspase-3蛋白表達:與sham組比較，后兩組動物腦挫傷灶周腦組織中Caspase-3陽性細胞數(shù)及其著色深度明顯增高，且DC+組Caspase-

7、3陽性細胞數(shù)（31.082±5.661）明顯低于DC-組（49.927±4.691），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　Caspase-12蛋白表達:與sham組比較，后兩組動物腦挫傷灶周腦組織中Caspase-12陽性細胞數(shù)和其著色程度明顯增高，且DC+組Caspase-12陽性細胞數(shù)(29.687±4.728)明顯低于DC-組(48.137±3.523)，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　5 Western

8、 Blot檢測細胞核Nrf2蛋白，caspase-3和caspase-12蛋白
　　與sham組比較，后兩組動物腦挫傷灶周腦組織中Nrf2核蛋白表達明顯增高，DC+組為（0.759±0.024），DC-組為（0.575±0.049），DC+組Nrf2蛋白表達明顯高于DC-組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　與sham組比較，后兩組大鼠腦挫傷灶周腦組織中caspase-3蛋白表達明顯增高，DC+組為(0.721±0.0

9、69)，DC-組為(0.933±0.0465)，DC+組caspase-3蛋白表達明顯低于DC-組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　與sham組比較，后兩組大鼠腦挫傷灶周圍腦組織中caspase-12蛋白表達明顯增高，DC+組為(0.634±0.055)，DC-組為(0.827±0.027)，DC+組caspase-12蛋白表達明顯低于DC-組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　6 TUNEL熒光檢測法檢查凋

10、亡細胞
　　三組動物均可見TUNEL陽性細胞，其中，sham組僅見少量的陽性細胞。與sham組比較，后兩組腦挫傷灶周圍腦組織中TUNEL陽性凋亡細胞數(shù)量明顯升高，且DC+組（32.102±5.824）凋亡指數(shù)明顯低于DC-組（45.186±6.536），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論:
　　去骨瓣減壓術能夠上調Nrf2的活性，通過抑制caspase-3及caspase-12表達，發(fā)揮抗神經(jīng)細胞凋亡的神經(jīng)