白藜蘆醇對大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用及保護(hù)機(jī)制.pdf

1、研究目的：
　　 視網(wǎng)膜缺血與許多眼部疾病的發(fā)生發(fā)展存在聯(lián)系，比如視網(wǎng)膜血管阻塞性疾病，新生血管年齡相關(guān)性黃斑變性，增生性糖尿病視網(wǎng)膜病和青光眼等，這些眼部疾病對視力存在嚴(yán)重的威脅。白藜蘆醇是一種存在于紅酒中的多酚化合物，有很強(qiáng)的抗氧化的能力，在腦缺血灌注損傷、小鼠視網(wǎng)膜血管退行性損傷及體外視神經(jīng)病變中都起到神經(jīng)保護(hù)作用。本次研究將主要驗證白藜蘆醇是否對大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷有保護(hù)作用，并且進(jìn)一步探討其保護(hù)機(jī)制。本論文從兩個方

2、面進(jìn)行研究:
　　 1.大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型的建立及白藜蘆醇的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　 2.白藜蘆醇對于大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。
　　 研究方法：
　　 1.大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型的建立及白藜蘆醇的神經(jīng)保護(hù)作用
　　 在本研究中我們采用的損傷模型是Wistar大鼠高眼壓模型，即對大鼠的視網(wǎng)膜采用高壓（120mmHg）壓迫（造成缺血損傷），持續(xù)時間是60分鐘，再灌注的時

3、間是1天。應(yīng)用熒光金染料逆行追蹤標(biāo)記檢測視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活的細(xì)胞數(shù)，實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-timePCR)及蛋白印記法檢測Thy-1的表達(dá)水平，視網(wǎng)膜電生理檢測b波振幅及b波比值的變化，免疫組織化學(xué)法檢測膽堿乙?；D(zhuǎn)移酶及波形蛋白的表達(dá)水平。
　　 2.白藜蘆醇對于大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。
　　 應(yīng)用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-timePCR)及蛋白印記法檢測HO-1(血紅素氧化酶-1

4、)，MMP-9（基質(zhì)金屬蛋白酶-9）及iNOS（誘導(dǎo)型一氧化氮合酶）的表達(dá)水平。
　　 研究結(jié)果：
　　 缺血再灌注損傷前給予溶劑會造成視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活數(shù)目減少，Thy-1的mRNA/蛋白表達(dá)水平下降，視網(wǎng)膜電生理b波振幅及b波比值降低，無長突細(xì)胞胞體數(shù)目減少及神經(jīng)纖維膽堿乙?；D(zhuǎn)移酶的熒光強(qiáng)度減弱，Müller細(xì)胞標(biāo)志蛋白-波形蛋白的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，以及HO-1，MMP-9及iNOSmRNA/蛋白表達(dá)水平升高。在視網(wǎng)

5、膜缺血之前15分鐘給予實(shí)驗大鼠不同劑量的白藜蘆醇，可以呈劑量依賴性并且明顯地改變上述損傷變化。較缺血再灌注損傷組，白藜蘆醇給藥組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞存活數(shù)目增多，Thy-1的mRNA/蛋白表達(dá)水平上升，視網(wǎng)膜電生理b波振幅增加、b波比值升高，無長突細(xì)胞胞體數(shù)增多及神經(jīng)纖維膽堿乙?；D(zhuǎn)移酶的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，Müller細(xì)胞標(biāo)志蛋白-波形蛋白的熒光強(qiáng)度減弱，以及HO-1mRNA/蛋白表達(dá)水平更加升高，MMP-9及iNOSmRNA/蛋白表達(dá)水平下降