RNA干擾沉默NgR基因表達對膠質瘤細胞侵襲、粘附及凋亡的影響.pdf

1、本文從以下幾個方面進行論述。
　　第一部分 NgR在膠質瘤細胞中的表達
　　目的：研究NgR在大鼠C6膠質瘤細胞中的表達。
　　方法：培養(yǎng)大鼠C6膠質瘤細胞，以NgR兔抗鼠抗體標記，常規(guī)免疫熒光染色，共聚焦熒光顯微鏡下觀察并拍照。
　　結果：通過免疫熒光檢測，NgR抗體標記組C6膠質瘤細胞內可見明顯熒光，無NgR抗體組未觀察到熒光。
　　結論：膠質瘤中存在NgR的高表達，提示NgR可能參與腫瘤細胞的生長調控

2、。
　　第二部分 RNA干擾抑制膠質瘤細胞NgR的表達
　　目的：建立shRNA，并檢測shRNA對膠質瘤細胞中NgR表達的影響。
　　方法：將構建成功的目的質粒和亂序對照質粒在脂質體Lipofectamine2000的介導下轉染大鼠C6膠質瘤細胞，72小時后分別用RT-PCR和Western Blot檢測NgR mRNA與蛋白質的表達情況。
　　結果：轉染質粒后，目的質粒組NgR mRNA表達量為亂序對照質粒組

3、的1/5，NgR蛋白表達量約為亂序對照質粒組的1/2。
　　結論：通過RNA干擾技術，可成功的干擾NgR在C6膠質瘤細胞中的表達。
　　第三部分 RNA干擾沉默NgR對膠質瘤細胞增殖、侵襲、粘附及凋亡的影響
　　目的：研究NgR基因表達沉默對大鼠C6膠質瘤細胞增殖、侵襲、粘附及凋亡的影響。
　　方法：轉染72小時后采用MTT檢測C6細胞增殖變化；通過Transwell侵襲實驗、粘附實驗、劃痕實驗分別檢測轉染細胞在

4、Nogo-66培養(yǎng)基中侵襲力、粘附力及遷移力的變化；分別采用流式細胞術（PI-Annexin V雙標）、Western Blot、Tunel實驗檢測轉染腫瘤細胞自發(fā)凋亡率的變化。
　　結果：轉染NgR-shRNA組C6細胞增殖率下降，自發(fā)凋亡率明顯增高，Nogo-66培養(yǎng)基中C6細胞侵襲力、粘附力及遷移力明顯增高。
　　結論：干擾NgR的表達可抑制膠質瘤細胞的增殖，促使凋亡增加，減弱Nogo-66介導的抑制膠質瘤細胞侵襲力、