促腎上腺皮質激素釋放激素、核轉錄因子c-Fos-AP-1及間隙連接蛋白-43在分娩發(fā)動機制中的研究.pdf

1、人類的分娩發(fā)動機制復雜，其動因尚不清楚，早產(chǎn)及過期產(chǎn)是增加圍產(chǎn)兒病死率的重要原因。因此，對分娩發(fā)動這一生理過程及其機制的進一步研究是防治早產(chǎn)及過期產(chǎn)的關鍵。 研究發(fā)現(xiàn)促腎上腺皮質激素釋放激素(Corticotrophin-releas-ing hormone，CRH)在子宮收縮和分娩發(fā)動中起重要作用，認為可能是分娩發(fā)動的啟動因子。但其具體機制目前還不清楚。間隙連接蛋白-43(Connexin-43，Cx43)在子宮平滑肌中表達增

2、加是子宮收縮分娩發(fā)動的重要物質基礎。細胞核轉錄因子激活蛋白-1(Activator-protein-1，AP-1)能與許多基因上的AP-1位點結合，參與調控靶基因轉錄。在Cx43基因的啟動子區(qū)域有AP-1結合位點，AP-1可促進Cx43的轉錄和蛋白表達；已有研究表明，AP-1亞單位c-Fos在Cx43的表達中發(fā)揮重要調節(jié)作用。因此，我們設想從基因水平特異性的阻斷子宮平滑肌細胞內AP-1的活性而競爭性抑制Cx43的表達，進而阻止分娩發(fā)動，

3、為早產(chǎn)的防治提供新的思路。Decoy核酸技術作為一個新的基因治療策略，可特異性的阻斷核轉錄因子的活性而抑制下游基因的表達。為證實我們的設想，并為利用AP-1 decoy寡核苷酸(ODN)類藥物防治早產(chǎn)提供理論依據(jù)和技術基礎，本研究借助陽離子脂質體介導的基因轉染技術，首次應用AP-1 decoy ODN競爭性地阻斷子宮平滑肌細胞內AP-1的活性，進行了以下二個方面的研究。 第一部分促腎上腺皮質激素釋放激素、c-Fos及間隙連接蛋白

4、-43在分娩發(fā)動中的相關性研究目的探討促腎上腺皮質激素釋放激素(Corticotrophin-releas-ing hormone，CRH)、c-Fos和間隙連接蛋白-43(Connexin-43,Cx43)在足月妊娠子宮平滑肌中的表達變化及它們在分娩發(fā)動中的相關性。 方法；選擇2006年2月～2006年9月在中南大學湘雅二醫(yī)院住院足月臨產(chǎn)產(chǎn)婦30例(in labor，L組)，足月未臨產(chǎn)產(chǎn)婦30例(notin labor，NL組

5、)，未孕婦女因宮頸內瘤樣病變行子宮切除術患者30例(對照組in non-pregnant，NP組)。應用放射免疫方法測定三組婦女靜脈血中CRH的含量；用核酸原位雜交技術和SP免疫組化法檢測子宮平滑肌中c-Fos、Cx43 mRNA及蛋白的表達水平。 結果；1)足月臨產(chǎn)組母血CRH水平(371.79±54.13 pg/ml)高于足月未臨產(chǎn)組(157.23±47.71 pg/ml)，P<0.05，足月未臨產(chǎn)組高于對照組(5.68±3

6、.18 pg/ml)，P<0.05。2)c-Fos mRNA及蛋白的陽性信號主要定位于子宮平滑肌細胞核內，少量位于細胞漿內；c-Fos在子宮平滑肌組織中的mRNA和蛋白表達的陽性指數(shù)：足月臨產(chǎn)組(5.44±1.66，5.36±1.52)分別高于足月未臨產(chǎn)組(4.14±0.88，3.86±0.90)及對照組(1.04±0.38，1.24±0.35)，各組間存在顯著性差異，P<0.05。3)Cx43 mRNA及蛋白的陽性信號定位于子宮平滑肌

7、細胞漿內；Cx43在子宮平滑肌組織中的mRNA和蛋白表達的陽性指數(shù)：足月臨產(chǎn)組(5.48±1.43，5.58±1.28)分別高于足月未臨產(chǎn)組(4.08±0.58，4.10±0.52)及對照組(1.54±0.64，1.14±0.59)，各組間存在顯著性差異，P<0.05。4)母血中CRH水平分別與子宮平滑肌組織中c-Fos mRNA和蛋白的表達水平呈正相關(r<,1>=0.62，r<,2>=0.50)，P<0.05；與子宮平滑肌組織中Cx

8、43mRNA和蛋白的表達水平呈正相關(r<,3>=0.52，r<,4>=0.68)，P<0.05；子宮平滑肌組織中c-FosmRNA和蛋白表達水平與Cx43mRNA和蛋白的表達水平呈正相關(r<,5>=0.51，r<,6>=0.60)，P<0.05a 結論；母血中CRH水平、子宮平滑肌中c-Fos和間隙連接蛋白Cx43的表達水平與分娩發(fā)動密切相關，且三者間表達變化呈正相關。 第二部分促腎上腺素皮質激素釋放激素通過核轉錄因

9、子c-fos/AP-1促進人子宮平滑肌細胞間隙連接蛋白-43的表達目的探討人類促腎上腺素皮質激素釋放激素對子宮平滑肌中Cx43的調節(jié)作用和c-Fos/AP-1激活的信號傳導途徑。 方法；原代培養(yǎng)人未孕子宮平滑肌細胞(從行子宮切除術的未孕患者獲得)，給予不同濃度的CRH干預，瞬時轉染AP-ldecoyoligodeoxynucleotide(ODN)以阻斷Cx43上的AP-1結合位點；采用用免疫熒光檢測Cx43蛋白表達，熒光素酶檢

10、測AP-1的活性，c-Fos和Cx43的mRNA和蛋白表達分別用real-time RT-PCR和Western blot檢測。 結果；在未孕子宮平滑肌細胞，CRH促進了Cx43的表達，激活了AP-1啟動子的活性。CRH顯著增強c-fos、Cx43 mRNA和蛋白表達(p<0.05)，且有劑量依賴趨勢。轉染足量的含有AP-1結合位點的AP-1decoy ODN后，不影響CRH對c-Fos表達的調控，卻明顯抑制了Cx43mRNA和