膠原—透明質(zhì)酸鈉—纖維蛋白膠復(fù)合去抗原松質(zhì)骨支架的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、關(guān)節(jié)軟骨的損傷是目前臨床上常見(jiàn)的病變，以受力最大的膝關(guān)節(jié)和髖關(guān)節(jié)為多。但是軟骨的自身修復(fù)能力有限，且關(guān)節(jié)軟骨的損傷往往要伴發(fā)軟骨下骨的損傷。同時(shí)，骨壞死到后期多會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)面塌陷而破壞關(guān)節(jié)軟骨，故無(wú)論長(zhǎng)骨干骺端的病變?cè)l(fā)于骨還是軟骨，后期均會(huì)引起骨軟骨的破壞及缺損。目前治療骨軟骨缺損的方法有很多，組織工程方法是研究的熱點(diǎn)。本研究設(shè)計(jì)構(gòu)建了一種新型骨軟骨一體化的支架材料，并對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行探索研究。研究結(jié)果證明該支架材料能夠滿(mǎn)足細(xì)胞的黏附、生

2、長(zhǎng)和增殖，對(duì)兔關(guān)節(jié)骨軟骨缺損具有良好的修復(fù)作用。
　　1.膠原-透明質(zhì)酸鈉-纖維蛋白膠復(fù)合去抗原牛松質(zhì)骨支架的制備及結(jié)構(gòu)特征
　　目的：探索膠原-透明質(zhì)酸鈉-纖維蛋白膠多孔支架復(fù)合去抗原牛松質(zhì)骨的骨軟骨一體化支架的制備方法及其結(jié)構(gòu)特征。
　　方法：酸溶法制備鼠尾膠原；氯仿甲醇脫脂，過(guò)氧化氫脫蛋白，稀鹽酸部分脫鈣制備去抗原牛松質(zhì)骨；將膠原、透明質(zhì)酸鈉及纖維蛋白膠混勻，利用纖維蛋白膠的粘合性與去抗原牛松質(zhì)骨復(fù)合，凍干后經(jīng)碳

3、化二亞胺交聯(lián)24h，成為骨軟骨一體化的支架材料。通過(guò)大體觀(guān)察和掃描電鏡觀(guān)察了解材料的孔徑和交通情況。
　　結(jié)果：支架材料大體呈白色，骨相與軟骨相分界明顯，結(jié)合緊密，吸水性較好；經(jīng)交聯(lián)和復(fù)合的一體化骨軟骨支架材料具有良好的三維多孔結(jié)構(gòu)，骨相孔徑約300～500μm，軟骨相孔徑約80～120μm，孔隙較均勻。
　　結(jié)論：膠原-透明質(zhì)酸鈉-纖維蛋白膠多孔支架復(fù)合去抗原牛松質(zhì)骨的一體化材料的大體形態(tài)正常，空間結(jié)構(gòu)可以滿(mǎn)足細(xì)胞黏附生長(zhǎng)

4、以及體內(nèi)修復(fù)缺損的結(jié)構(gòu)要求。
　　2.膠原-透明質(zhì)酸鈉-纖維蛋白膠復(fù)合去抗原牛松質(zhì)骨支架材料的生物相容性研究
　　目的：探索膠原-透明質(zhì)酸鈉-纖維蛋白膠多孔支架復(fù)合去抗原牛松質(zhì)骨的骨軟骨一體化支架的生物相容性。
　　方法：分離、增殖仔兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞（BMSCs），取第3代BMSCs接種至支架材料復(fù)合培養(yǎng)，1、3、5、7和10d后，行MTT檢測(cè)并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)；取第1d和7d標(biāo)本，行掃描電鏡觀(guān)察。
　　結(jié)果：掃描

5、電鏡觀(guān)察可見(jiàn)1d和7d的支架材料的骨相及軟骨相均有細(xì)胞黏附，復(fù)合7d的材料上黏附的細(xì)胞量明顯多于復(fù)合1d，且細(xì)胞周?chē)谢|(zhì)分泌；MTT比色實(shí)驗(yàn)，OD值隨時(shí)間增長(zhǎng)，值10d到最大，顯示細(xì)胞在支架上的生長(zhǎng)良好，生長(zhǎng)曲線(xiàn)呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)趨勢(shì)。
　　結(jié)論：膠原-透明質(zhì)酸鈉-纖維蛋白膠多孔支架復(fù)合去抗原牛松質(zhì)骨的一體化材料具有良好的生物相容性,可用于骨軟骨聯(lián)合缺損的組織工程支架材料的研究。
　　3.膠原-透明質(zhì)酸鈉-纖維蛋白膠復(fù)合去抗原牛松

6、質(zhì)骨支架修復(fù)兔關(guān)節(jié)骨軟骨缺損的研究
　　目的：應(yīng)用膠原-透明質(zhì)酸鈉-纖維蛋白膠多孔支架復(fù)合去抗原牛松質(zhì)骨的骨軟骨一體化支架修復(fù)兔關(guān)節(jié)骨軟骨缺損，觀(guān)察其體內(nèi)的修復(fù)作用。
　　方法：取12只新西蘭兔，于后膝關(guān)節(jié)股骨髁間窩處制造約5.0mm的缺損，隨機(jī)選取6只兔的右后膝曠置處理，作為對(duì)照組；其余缺損均填充膠原-透明質(zhì)酸鈉-纖維蛋白膠復(fù)合去抗原牛松質(zhì)骨支架，作為實(shí)驗(yàn)組。在12周和24周后取材，大體觀(guān)察和組織學(xué)染色觀(guān)察缺損修復(fù)的情況。

7、
　　結(jié)果：大體觀(guān)察12周和24周后實(shí)驗(yàn)組的缺損組織，可見(jiàn)其被支架材料填充，表面光滑，而對(duì)照組突出于關(guān)節(jié)面，結(jié)構(gòu)不規(guī)則。組織學(xué)觀(guān)察顯示，12周的修復(fù)體邊界基本與正常組織整合，材料大部分降解，軟骨層有透明軟骨樣組織形成；24周實(shí)驗(yàn)組新生的軟骨組織更接近于正常軟骨，骨小梁結(jié)構(gòu)完整，松質(zhì)骨支架已基本被降解。
　　結(jié)論：膠原-透明質(zhì)酸鈉-纖維蛋白膠多孔支架復(fù)合去抗原牛松質(zhì)骨的一體化材料修復(fù)兔關(guān)節(jié)骨軟骨缺損具有較好的修復(fù)效果，基本恢復(fù)