體外雪旺細胞培養(yǎng)與純化的實驗研究.pdf

1、目的：探討簡單、可靠地獲取大量純度高、活力強的雪旺細胞的細胞培養(yǎng)方法。 方法：取新生4-6天大鼠坐骨神經(jīng)。利用植塊法培養(yǎng)雪旺細胞。采用混合酶多次消化法，差速貼壁法，結(jié)合阿糖胞苷抑制成纖維細胞來分離雪旺細胞，促細胞增殖劑增加雪旺細胞數(shù)量，低濃度胰酶快速消化傳代進一步純化雪旺細胞，并對培養(yǎng)的細胞進行細胞計數(shù)、MTT法檢測細胞增殖能力、形態(tài)學(xué)觀察和細胞免疫化學(xué)染色鑒定。 結(jié)果：雪旺細胞生長良好，經(jīng)細胞免疫組織化學(xué)染色鑒定，培養(yǎng)

2、8天原代雪旺細胞的純度可達94％以上，傳代雪旺細胞純度在95％以上。細胞計數(shù)顯示原代雪旺細胞倍增時間約為5天。生長曲線顯示第2代雪旺細胞倍增時間為3天。 結(jié)論：采用植塊法與混合酶多次消化法，差速貼壁法，抗有絲分裂法，促細胞增殖劑，低濃度胰酶快速消化法相結(jié)合的改良的雪旺細胞培養(yǎng)純化方法能快捷地獲得純度高、活力強的大量雪旺細胞。 應(yīng)用該改良的雪旺細胞培養(yǎng)法培養(yǎng)的原代雪旺細胞純度為94.3％，傳代后的雪旺細胞純度為95.5％，