依達(dá)拉奉和神經(jīng)節(jié)苷脂預(yù)處理對(duì)乳鼠離體腦片不同性質(zhì)損傷神經(jīng)保護(hù)作用的比較研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:比較依達(dá)拉奉(EDA)和神經(jīng)節(jié)苷脂(GM1)預(yù)處理對(duì)谷氨酸及過(guò)氧化氫不同性質(zhì)損傷后大鼠皮層腦片的神經(jīng)保護(hù)作用。
  方法:采用新生7日齡SD大鼠,取出大腦后采用切片機(jī)將皮層部分切為腦片進(jìn)行離體腦片培養(yǎng),因不同性質(zhì)損傷采用谷氨酸損傷模型和過(guò)氧化氫損傷模型兩種模型,兩種損傷模型又分別分為對(duì)照組、損傷組、100μmol/L EDA預(yù)處理組及1μmol/L GM1預(yù)處理組,由于對(duì)照組相同,所以共分7組,每組12例。對(duì)照組腦片培養(yǎng)第四

2、天用正常培養(yǎng)基替代損傷培養(yǎng)基孵育30min;損傷組(分2組)腦片于培養(yǎng)第四天給予含1mmol/L谷氨酸或0.1mmol/L過(guò)氧化氫的培養(yǎng)基孵育30min;藥物保護(hù)預(yù)處理組(分4組)腦片于培養(yǎng)第三天轉(zhuǎn)至含有100μmol/L EDA或1μmol/L GM1的培養(yǎng)基中孵育24h,第四天同損傷組。谷氨酸或過(guò)氧化氫損傷后24h測(cè)定腦片2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色的A490值并計(jì)算組織損傷率,用乳酸脫氫酶(LDH)釋放率分析腦片活性,用

3、熒光染料Propidium Iodide(PI)觀察細(xì)胞損傷程度;損傷后72h腦片用尼氏體染色檢測(cè)神經(jīng)元數(shù)量,用蘇木素-伊紅(HE)染色后在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,用透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變,用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Caspase-9陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞的數(shù)量。
  結(jié)果:1.谷氨酸損傷模型兩種藥物預(yù)處理保護(hù)組與損傷組相比:藥物預(yù)處理組皮層腦片TTC染色A490值均升高,組織損傷率均減小,LDH釋放率均減小,PI熒光顯示紅色損

4、傷細(xì)胞數(shù)均減少,神經(jīng)元密度均增高,細(xì)胞形態(tài)受損程度和神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)病變均減輕,caspase-9表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞均減少;2.谷氨酸損傷模型兩種藥物預(yù)處理保護(hù)組之間比較:均無(wú)發(fā)現(xiàn)明顯差異;3.過(guò)氧化氫損傷模型兩種藥物預(yù)處理保護(hù)組與損傷組相比:藥物預(yù)處理組皮層腦片TTC染色A490值均升高,組織損傷率均減小,LDH釋放率均減小,PI熒光顯示紅色損傷細(xì)胞數(shù)均減少,神經(jīng)元密度均增高,細(xì)胞形態(tài)受損程度和神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)病變均減輕,caspase-9表達(dá)

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