moesin在胰腺癌嗜神經性中的分子機制及與疼痛的相關性.pdf

1、近年來，胰腺癌發(fā)病率在全國乃至全世界均呈明顯的上升趨勢。大約40%的胰腺癌患者在診斷時就已經發(fā)生轉移，而神經浸潤轉移是其最常見的轉移途徑和重要特點之一，也是導致胰腺癌病人術后復發(fā)率高和預后差的重要原因之一。目前認為神經浸潤是引起胰腺癌復發(fā)和癌性疼痛的重要原因，是其獨立預后指標。近年來，胰腺癌的侵襲與轉移，尤其是胰腺癌的神經定向轉移問題，日益成為臨床與基礎研究中的重點和熱點。 自從1889年Peget首次提出癌轉移的“種子與土壤”

2、學說、1929年Ewing提出腫瘤轉移的“機械與解剖”學說，多強調癌細胞自身的侵襲能力、運動能力等生物學特性的改變以及對組織、器官的被動適應。多年來，從亞細胞、細胞及其微環(huán)境、細胞與宿主機體的相互關系等諸多方面進行了深入廣泛的研究，初步形成現(xiàn)代腫瘤轉移理論：基因參與下的轉移調控機制。該機制認為，腫瘤是由諸多因素決定的多步驟、序貫性的生物學過程。除強調腫瘤細胞自身因素外，更強調促轉移因素與抑轉移因素間網絡調節(jié)的平衡性、宿主微環(huán)境的可塑性、

3、宿主整體/局部免疫和腫瘤細胞的主動適應性變化等。 但胰腺癌神經組織浸潤的確切分子機制至今尚不明朗。以往研究認為，主要是神經周圍間隙中張力較低，易于腫瘤生長，胰腺癌神經浸潤是在平面最小阻力處即神經束膜的薄弱部位侵入神經，并在神經周圍間隙內連續(xù)浸潤，到達遠處形成新的轉移灶。近年來的研究表明，某些表面特性分子和神經組織周圍微環(huán)境成分在腫瘤的嗜神經性上可能起著重要作用。膜結構伸展刺突蛋白moesin，是ERM蛋白家族的成員之一，表達于許

4、多細胞膜突出部位，如偽足、微絨毛等，對維持細胞骨架及運動都起著重要作用，參與人體生理狀態(tài)下的許多基本生命活動，是近年來被廣泛關注的一類特殊蛋白質。近年發(fā)現(xiàn)其廣泛表達于多種腫瘤組織中，在腫瘤發(fā)生、浸潤及轉移過程中可能扮演著重要角色，這一觀點近年來已在口腔鱗狀上皮細胞癌、宮頸癌、頭頸惡性腫瘤以及某些消化系統(tǒng)的惡性腫瘤組織中得到了證實。但moesin是否在胰腺癌轉移途徑中發(fā)揮了作用，其作用機制仍不太清楚。為此，本課題選擇moesin——這一新

5、近受到關注的指標作為研究切入點，探討胰腺癌發(fā)生神經侵襲轉移的原因和機制。 目的： 收集天津醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院病理科手術切除的胰腺癌組織標本，從免疫組織化學、RT-PCR、實時熒光定量PCR、ELISA等方法檢測moesin、β-NGF和MMP-7在人胰腺癌組織中的表達分布，初步探討moesin、β-NGF和MMP-7在人胰腺癌組織中的作用及其與臨床病理學特征之間的關系。并在以上研究的基礎上結合患者臨床癥狀，探討moes

6、in、β-NGF和MMP-7與胰腺癌患者疼痛癥狀的關系，以及胰腺癌疼痛與其臨床病理學改變的相關性，進一步明確其神經性疼痛產生的原因，并探索緩解胰腺癌患者疼痛的方法，提高其生存質量。 方法： （1）采用免疫組織化學的方法檢測胰腺癌組織中moesin、β-NGF和MMP-7各指標的表達、分布特點，并且分析其與臨床病理學特征之間的關系。 （2）應用PT-PCR、實時熒光定量PCR、ELISA等分子生物學技術檢測該組標本

7、中moesin、β-NGF和MMP-7的蛋白表達，在驗證免疫組化結果的同時，分析moesin對癌細胞中β-NGF和MMP-7表達的影響，以探索moesin對胰腺癌細胞侵襲轉移作用的分子機制和此過程中moesin可能存在的調控機制。 （3）在上述二部分的基礎上，初步探討moesin、β-NGF和MMP-7與胰腺癌患者疼痛癥狀的關系，以及胰腺癌疼痛與其臨床病理學改變的相關性，進一步明確其神經性疼痛產生的原因，并探索緩解胰腺癌患者疼痛

8、的方法。 （4）采用SPSS15.0統(tǒng)計學軟件包進行數(shù)據處理，以p<0.05為有顯著性差異。 結果： （1）moesin、β-NGF、MMP-7均參與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展。44例胰腺癌組織中有24例存在神經浸潤（幾率為54.55%）。侵入型8例，圍神經型16例。Moesin的表達在胰腺癌組織中明顯高于正常組織，在胰體尾部癌組織中高于胰頭癌，在有神經侵犯組明顯高于無神經侵犯組，而且靠近神經組織的癌細胞moesin陽性程

9、度高于遠離神經組織的癌細胞。此外，隨著癌細胞分化程度的降低和臨床TNM分期的增加，moesin表達水平增加，moesin表達在有淋巴結轉移組比無淋巴結轉移組明顯增加。Β-NGF、MMP-7的表達與胰腺癌臨床病理學特征的關系和moesin相似，經過相關性分析顯示β-NGF、MMP-7和moesin的表達呈現(xiàn)正相關。 （2）運用RT-PCR、實時熒光定量PCR、ELISA等分子生物學檢測方法從RNA轉錄、蛋白表達、基因表達等三個方面

10、來驗證胰腺癌細胞中moesin的表達情況。Moesin在胰腺癌組織中高表達，且與β-NGF和MMP-7之間呈現(xiàn)正相關的表達，該結論與第一部分免疫組織化學方法得到的結論一致，從而進一步驗證了moesin作為一個新近受到關注的指標與胰腺癌病情進展相關，并參與了胰腺癌的浸潤轉移機制。 （3）胰腺癌伴有疼痛者比不伴有疼痛者的moesin、β-NGF和MMP-7水平高，而且第一和第二部分結果證明moesin、β-NGF和MMP-7水平與胰

11、腺癌嗜神經性有關，說明胰腺癌患者的疼痛發(fā)生和胰腺癌的嗜神經性、胰腺癌細胞的moesln、β-NGF和MMP-7表達水平有關。胰腺癌腫瘤位置、大小、TNM分期以及其對胰內神經、胰腺前方被膜和腹膜后組織的浸潤與疼痛有顯著相關性，而分化程度、淋巴結轉移以及其對胰外神經、遠端膽管和十二指腸壁的浸潤與疼痛沒有顯著相關性。 結論： （1）moesin、β-NGF、MMP-7均參與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展，與胰腺癌嗜神經性成正相關，并且與臨床