人鼻咽癌耐順鉑細胞系的放射敏感性研究.pdf

1、背景和目的
　　鼻咽癌是中國南部和東南亞地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一,對放射治療和化療均比較敏感,早期鼻咽癌治療首選放射治療,而晚期或已經(jīng)發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的鼻咽癌需要聯(lián)合放化療。然而目前鼻咽癌的治療效果仍然不能令人滿意,這在很大程度上是由于腫瘤細胞產(chǎn)生了多藥耐藥性(multidrug resistance, MDR)而使很多晚期病人最終死于化療失敗。順鉑(cisplation,CDDP)在鼻咽癌治療中最常作為一種化療藥物或放療增敏劑使用,

2、順鉑的獲得性耐藥常常導致臨床治療失敗。近年來,新的化療藥物顯示了明顯的單藥活性,如紫杉醇(Paclitaxel),吉西他濱(gemcitabine)等。紫杉醇主要用于一線治療,而吉西他濱很有希望會成為鼻咽癌的二線治療藥物。特別是首程含順鉑的治療后復發(fā)或轉(zhuǎn)移的患者,再用順鉑為基礎的化療療效欠佳。本實驗中我們探討人鼻咽低分化鱗癌細胞株及其耐順鉑細胞株的放射敏感性特征,以及順鉑對親代和耐藥細胞的增敏差異,并初步研究吉西他濱對耐藥細胞的增敏作用

3、及其增敏機制。
　　方法
　　以穩(wěn)定生長于1ug/ml順鉑的人鼻咽癌順鉑耐藥細胞株 HNE1/CDDP及其親代細胞系HNE1為體外研究對象。第一部分:克隆形成法檢測順鉑對兩種細胞的毒性,并求出半數(shù)抑制濃度 IC50。實驗分為單純照射組和照射加藥組,藥物為順鉑1ug/ml。應用克隆形成方法,觀察單純照射和照射加藥物對細胞的殺傷作用,用radiomed軟件進行曲線擬合作圖。第二部分:克隆形成法測定吉西他濱對人鼻咽癌低分化鱗癌親代

4、及耐藥株的毒性,并求出IC50;細胞生長曲線和克隆形成實驗探討低濃度吉西他濱的細胞毒性;免疫組織化學觀察吉西他濱對p53、bax、bcl-2基因表達的影響;末端脫氧核苷酰轉(zhuǎn)移酶法(TUNEL法)檢測細胞凋亡;流式細胞術觀察吉西他濱對細胞周期分布的影響;克隆形成法觀察吉西他濱對鼻咽癌順鉑耐藥細胞的放射敏感性影響。
　　結果
　　第一部分:HNE1在CDDP作用1小時下IC50=8.86±1.95ug/ml,HNE1/CDDP在

5、順鉑作用1小時下IC50=27.12±3.7ug/ml。HNE1和HNE1/CDDP受放射后的D0值分別為0.8593Gy和0.8757Gy。HNE1的單純照射組和照射加藥(CDDP)組D0值分別為0.8593Gy和0.7152Gy,增敏比是1.2015;HNE1/CDDP單純照射組和照射加藥(CDDP)組D0值分別為0.8757Gy和0.9298Gy,增敏比是0.9418;
　　第二部分:HNE1在吉西他濱作用下IC50=1.3

6、±0.1 ug/ml,HNE1/CDDP的吉西他濱作用下IC50=1.9±0.2 ug/ml,1.5ug/ml吉西他濱作用24小時對鼻咽癌耐藥株HNE1/CDDP有輕度的細胞毒性。吉西他濱作用后細胞凋亡增加,bax表達上調(diào), p53沒有明顯變化,藥物作用前后 bcl-2表達均呈陰性。并且使腫瘤細胞周期阻滯在 G1期,而 S期細胞比例則明顯減少。HNE1/CDDP單純照射組和照射加藥(吉西他濱)組D0值分別為0.8757Gy和0.6350

7、Gy,增敏比是1.3791。
　　結論
　　1、人鼻咽低分化鱗癌耐順鉑細胞株HNE1/CDDP對CDDP呈低度耐藥,對吉西他濱也呈低度耐藥;
　　2、 HNE1/CDDP對順鉑和放射線沒有交叉抵抗;
　　3、順鉑對HNE1具有明顯的放射增敏作用,但是順鉑對HNE1/CDDP細胞株失去了放射增敏作用;
　　4、吉西他濱對HNE1/CDDP細胞株具有放射增敏作用;
　　5、低濃度吉西他濱對耐順鉑細胞系(H