多重耐藥鮑曼不動桿菌耐藥、耐消毒劑基因研究及同源性分析.pdf

1、目的：明確臨床分離的多重耐藥鮑曼不動桿菌耐藥基因的特點，并研究其對常用消毒劑的耐受機制。
　　方法：
　?。?）收集2009-2011年菌株做菌種鑒定，藥敏試驗。
　?。?）進行碳青霉烯酶篩選試驗。
　?。?）用OXA-23、qacE△1、tnpU、aac6、ISAab1、bla OXA58、blaCTX-M、TEM-Q、SHV-Q、NDM-1等引物基因?qū)Τ樘岬幕蚪MDNA進行擴增，檢測耐藥基因。
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2、）用脈沖場凝膠電泳對采集自呼吸監(jiān)護病區(qū)的多重耐藥鮑曼不動桿菌進行同源性分析。
　?。?）NDM-1耐藥基因連接PMD18-T載體。
　?。?）觀察消毒劑含氯消毒劑和醋酸氯已定對63株多重耐藥鮑曼不動桿菌（MDRAB）的殺滅效果。研究MDRAB耐消毒劑機制，研究MDRAB耐消毒劑基因的表達。
　　結(jié)果：
　?。?）證實2009-2011年所收集的菌株為多重耐藥鮑曼不動桿菌，對常用7類抗假單鮑菌藥物青霉素類、頭孢菌素

3、類、氨基糖甙類、碳青霉烯類、四環(huán)素類、喹諾酮類、磺胺類中的至少5類對應(yīng)的抗生素同時耐藥，耐藥率高達99％，表現(xiàn)為多重耐藥。
　?。?）碳青霉烯酶篩選試驗顯示，耐藥菌株產(chǎn)碳青霉烯酶，陽性率為67.7%。
　?。?）耐藥基因檢測顯示耐藥菌株8種耐藥基因陽性。對aac6耐藥基因高度表達，陽性率為93%；OXA23次之，陽性率為87.1%；qacE△1為81.2%；tnpU陽性率為78.3%；ISAab陽性率為64.9%；TEM陽性

4、率為62.8%；SHV陽性率為21.1%；檢出一株NDM-1陽性菌株。
　　（4）3株分離自呼吸監(jiān)護病區(qū)的菌株經(jīng) PFGE確證相似度較高，同源性高達87%。
　?。?）成功構(gòu)建PMD18-T-NDM-1載體。
　?。?）63株MDRAB菌株中,檢測出耐消毒劑基因qacE△1-sul147株，陽性率為：74.6%。含氯消毒劑消毒濃度>5000 mg/L時，能殺滅所有試驗菌株。當(dāng)醋酸氯已定濃度為4-8mg/L時，陰性菌株即