川芎嗪對炎性損傷的內皮細胞及小膠質細胞的保護作用研究.pdf

1、血管內皮細胞功能障礙和小膠質細胞的激活分別與心腦血管疾?。ㄈ鐒用}粥樣硬化）和神經(jīng)退行性病變（如老年性癡呆）有著密切的聯(lián)系，炎癥損傷是重要的誘因，控制炎癥發(fā)生是改善內皮細胞功能，抑制小膠質細胞活化，保護二者免受損傷，預防和治療心血管疾病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病的一個重要手段。本研究主要探討中藥活性成分川芎嗪（TMP）對炎性損傷的血管內皮細胞和小膠質細胞的保護作用。
　　 PartⅠ：TMP對炎性損傷的內皮細胞的保護作用研究
　　 為

2、了探討TMP對氧化應激所致內皮細胞損傷的保護作用，首先，采用體外自由基清除試驗證明川芎嗪具有顯著的OH清除能力，對DPPH和NO均具有一定的清除能力，而對H2O2及脂質過氧化反應清除作用不明顯。其次，我們以人臍靜脈內皮細胞（HUVECs）為模型探討TMP對H2O2誘導的氧化損傷的保護作用。結果表明，TMP預處理24 h可抑制H2O2引起的HUVEC細胞活力下降，并呈濃度依賴關系（76.5％vs control，P<0.05，H2O240

3、0μM for12 h；88.7％vs control，TMP150μg/ml時），并抑制胞內ROS的生成（83.1％vs H2O2組，P<0.05，TMP150μg/ml）。另外，TMP上調超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的活性（TMP為150μg/ml時分別為H2O2組的144.1％和118.3％，P<0.05），降低細胞內MDA、NO及NOS的水平（TMP為150μg/ml時分別為H2O2組的83.8％，91.2％and78.7

4、％，P<0.05），并且TMP預孵育24 h有效抑制H2O2誘導的細胞凋亡和周期改變。
　　 為了驗證TMP對炎癥誘發(fā)的內皮細胞的保護作用，檢測了TMP對LPS誘導引起的HUVEC細胞損傷的保護作用。以TMP與LPS同內皮細胞孵育后不引起細胞活力的明顯改變（P>0.05）條件下確定藥物濃度，排除實驗模型中藥物細胞毒作用。結果顯示，LPS可抑制細胞NOS活性（67.3％vs control組，P<0.05）及胞內外NO含量（分別為

5、control組的68.8％和87.2％，P<0.05），增加胞內ROS水平（195.2％vs control組，P<0.01），促進細胞凋亡（150.6％vs control組，P<0.05），抑制正常細胞周期的進程（G0/G1期細胞109.9％vs control組，P<0.05），而TMP可恢復LPS所致的上述效應，并具有濃度依賴關系。綜上，此部分研究證明TMP可以抑制H2O2及LPS誘導的內皮細胞損傷。
　　 PaltⅡ

6、：TMP對炎性損傷的小膠質細胞的保護作用研究
　　 為了探討TMP對LPS誘導的N9小膠質細胞炎性激活的保護作用，N9細胞先與。TMP（對照為不含藥物培養(yǎng)基）孵育4-24 h再加LPS刺激，測定細胞活力，確立試驗模型的用藥濃度和作用時間，在此條件下測定相應的生物效應。結果顯示：TMP對硝普鈉溶液中產(chǎn)生的NO產(chǎn)物沒有直接清除作用，但可抑制LPS誘導的N9細胞中NO的分泌。而且，TMP在轉錄和翻譯水平下調LPS誘導的N9細胞iNOS

7、的高表達。同時，TMP抑制LPS誘導的N9細胞中NF-κB從胞漿到胞核的核轉位，抑制p38 MAPK、ERK1/2、JNK及Akt的磷酸化水平，但對P13K的磷酸化影響不明顯。深入研究表明，p38 MAPK、ERK1/2、JNK及P13K特異性抑制劑可以抑制LPS誘導的iNOS蛋白水平的表達。另外，TMP還可抑制LPS誘導的N9細胞中ROS的形成。表明：TMP通過MAPK和P13K途徑抑制LPS誘導的NO及iNOS的表達，并可抑制胞內R