乙肝病毒X蛋白對凋亡蛋白PDCD5表達的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、[目的]
　　 建立以及鑒定轉基因細胞L02/HBX，在獲得陽性克隆細胞后，通過RT-PCR,western-blot對PDCD5的mRNA與蛋白的檢測，研究乙肝病毒X蛋白（Hepatitis B virus X protein，HBx）對凋亡蛋白PDCD5的表達。
　　 [方 法]
　　 （1）復蘇及培養(yǎng)L02細胞，應用G418篩選L02細胞，得到細胞最低致死濃度。
　　 （2）建立轉染HBx基因的L0

2、2 (L02/HBX)細胞系，并通過RT-PCR,western-blot進行鑒定，確定HBx基因轉染成功。
　　 （3）通過Real-time PCR和Western Blot檢測轉染HBx基因后PDCD5mRNA和蛋白表達;
　　 [結 果]
　　 （1）復蘇并培養(yǎng)L02細胞，經G418篩選得知，當G418濃度在500-700ug/ml時，L02細胞全部死亡；當G418濃度在500ug/ml以下時，L02細胞

3、均可存活。所以經過試驗得出L02細胞的最低致死濃度為500ug/ml。
　　 （2）將HBx基因轉入L02肝細胞中，以500ug/ml G418篩選出轉染HBx的陽性克隆L02細胞。以RT-PCR和western-blot檢測HBx mRNA和蛋白的表達，確保成功建立轉染HBx基因的L02 (L02/HBX)細胞系。
　　 （3）轉染HBx基因的L02細胞中PDCD5mRNA和蛋白中的表達水平上調。
　　 [結

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