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文檔簡介
1、[目的]
建立以及鑒定轉基因細胞L02/HBX,在獲得陽性克隆細胞后,通過RT-PCR,western-blot對PDCD5的mRNA與蛋白的檢測,研究乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)對凋亡蛋白PDCD5的表達。
[方 法]
(1)復蘇及培養(yǎng)L02細胞,應用G418篩選L02細胞,得到細胞最低致死濃度。
(2)建立轉染HBx基因的L0
2、2 (L02/HBX)細胞系,并通過RT-PCR,western-blot進行鑒定,確定HBx基因轉染成功。
(3)通過Real-time PCR和Western Blot檢測轉染HBx基因后PDCD5mRNA和蛋白表達;
[結 果]
(1)復蘇并培養(yǎng)L02細胞,經G418篩選得知,當G418濃度在500-700ug/ml時,L02細胞全部死亡;當G418濃度在500ug/ml以下時,L02細胞
3、均可存活。所以經過試驗得出L02細胞的最低致死濃度為500ug/ml。
(2)將HBx基因轉入L02肝細胞中,以500ug/ml G418篩選出轉染HBx的陽性克隆L02細胞。以RT-PCR和western-blot檢測HBx mRNA和蛋白的表達,確保成功建立轉染HBx基因的L02 (L02/HBX)細胞系。
(3)轉染HBx基因的L02細胞中PDCD5mRNA和蛋白中的表達水平上調。
[結
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