促凋亡因子PDCD5在HBV感染相關肝病中的表達及意義.pdf

1、背景：凋亡或程序性細胞死亡(programmed cell death，PCD)是一個細胞自毀的遺傳控制程序，該程序對于所有動物的發(fā)育、保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)發(fā)揮至關重要的作用。凋亡是一個涉及大量基因的高度可調節(jié)程序，已發(fā)現(xiàn)多種因子參與調節(jié)凋亡過程，如TNF/Fas、Bcl-2家族等。程序化細胞死亡分子5(programmed cell death 5，PDCD5)是凋亡相關新基因，原名(TF-1 cell apoptosis-related

2、gene 19，TFAR19)，PDCD5基因編碼的蛋白在從酵母到哺乳動物中具有高度同源性。目前已有報道PDCD5與多種疾病相關，如各種人類腫瘤、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、銀屑病中該基因表達減弱，但其作用機制目前仍不清楚。本文通過檢測PDCD5和Fas在HBV感染攜帶者、HBV感染后慢性肝炎、肝硬化、肝癌、癌旁組織及肝細胞系中的表達情況，試圖揭示PDCD5與HBV感染相關肝臟疾病間的相互關系。 方法：本研究使用常規(guī)免疫組織化學方

3、法檢測了16例HBV攜帶者、46例慢性肝炎、23例活動性肝硬化、18例急性肝炎及40例肝細胞癌患者PDCD5的表達情況及Fas、Bcl-2等凋亡相關蛋白的表達；用流式細胞術檢測HBV感染相關肝臟疾病患者PBMC中的PDCD5的表達；用免疫細胞化學檢測各肝細胞系中PDCD5的表達；利用流式細胞術觀察去血清聯(lián)合干擾素誘導凋亡后各肝細胞系PDCD5的表達動態(tài)變化及不同細胞系之間的差異等。統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0軟件，各組間比較用Krus

4、kal-Wallis H檢驗：相關性分析用Spearman’s檢驗。 結果：肝組織免疫組織化學結果顯示，HBV攜帶者、HBV感染后急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化和肝癌等各型HBV感染相關性肝臟疾病肝組織呈現(xiàn)不同的PDCD5表達譜，各型之間PDCD5表達量均有統(tǒng)計學差異(χ2=93.155 P<0.0005)。PDCD5主要在細胞漿中表達，各型肝臟疾病中PDCD5陽性肝細胞的分布和表達強度具有各自的特點：慢性HBV攜帶者向慢性

5、肝炎的演變過程中、PDCD5表達逐漸增強(P<0.001)，而從慢性肝炎向肝硬化發(fā)展的過程中，有些肝細胞PDCD5開始表達減弱或轉陰，而肝癌組織中的肝癌細胞主要表現(xiàn)為陰性(陽性率僅為10％)。在大部分病理情況下，淋巴細胞中PDCD5為陰性，而一些腫瘤組織中浸潤的淋巴細胞呈現(xiàn)PDCD5陽性。以上肝組織中的PDCD5蛋白表達均與Fas的表達具有相關性。利用流式細胞術檢測外周血單個核細胞(PBMC)中的PDCD5表達發(fā)現(xiàn)，HBV感染患者的PD

6、CD5表達量高于正常人(P<0.001)，有待進一步闡明。 利用正常肝細胞系L-02細胞、肝癌細胞系HepG2細胞、在HepG2細胞中轉染了HBV DNA可以產(chǎn)生HBV病毒顆粒的HepG 2.2.15細胞、整合有70％HBV DNA并可以穩(wěn)定高分泌HBsAg的PLC/PRF/5細胞進行體外實驗。免疫細胞化學染色結果發(fā)現(xiàn)攜帶HBV基因的HepG2.2.15細胞和PLC/PRF/5細胞系在正常條件下部分細胞也表達PDCD5。與之相對

7、應，沒有病毒的L-02細胞和HepG2細胞則在正常培養(yǎng)條件下不表達PDCD5。利用流式細胞儀觀察去血清聯(lián)合干擾素誘導細胞凋亡后正常肝細胞L-02、肝癌細胞HepG2、HepG 2.2.15、PLC/PRF/5細胞的PDCD5表達量動態(tài)變化發(fā)現(xiàn)，各肝細胞系PDCD5表達變化不同，其表達敏感度顯示為L-02

8、的影響時發(fā)現(xiàn)，重組PDCD5對肝細胞僅有微弱的促凋亡作用，表明肝細胞系可能對外源性PDCD5不敏感。 結論：PDCD5在各種HBV感染后相關肝臟疾病中的表達譜有所不同，慢性乙型肝炎患者肝細胞中高表達，并隨炎癥程度的加重而表達增強；而在向癌癥演變的過程中表達減弱；HBV感染相關的肝臟疾病患者PBMC中PDCD5表達和正常入相比顯著增高，PDCD5蛋白的表達可能與HBV感染引起的各種肝臟疾病的發(fā)病機理相關。利用不同肝細胞系的體外實驗