甜菜離子注入誘變高糖突變體耐旱性和RAPD標記篩選.pdf

1、新疆是我國重要的甜菜產區(qū)，其單產處于全國領先地位。本研究對通過離子注入誘變獲得的高糖甜菜類型與未經離子注入的親本進行分子標記篩選，繪制遺傳圖譜。目的在于加對強目標基因的選擇和鑒定，為建立甜菜高糖性狀分子標記輔助選擇系統，為豐富甜菜種質資源、縮短育種年限提供依據。該文以甜菜離子注入高糖突變體S10和未經離子注入親本F104為材料，從甜菜葉片中提取基因組。DNA，對DNA進行RAPD分析，經800個10-核苷酸隨機引物對兩個親本材料及F<,

2、2>的篩選，并對離子注入誘變的材料進行抗旱性分析，通過試驗得出以下結論： 1．比較多種方法建立了適于甜菜基因組DNA提取的方法．改良SDS法，此方法便于較快速簡便的提取甜菜基因組DNA，經電泳檢，條帶清晰無降解，OD260/OD280的值在1.6～2.0之間，質量符合RAPD要求。 2．本試驗對RAPD反應體系中的Taq酶濃度、模板DNA濃度、Mg<'2+>濃度、dNTPs濃度、引物濃度進行了逐個優(yōu)化，建立了本試驗的RA

3、PD最佳反應體系：(1)反應程序：95℃預變性5min；94℃變性lmin 36℃退火lmin，72℃ 2min 45個循環(huán)；72℃延伸5min 4℃保存。 (2)反應體系：25u1反應液中，10×Buffer(100mmol/L Tris-HCI，100mmol/L KCL)2.5u1；2.5 mmol/L Mg<'2+>；0.20 mmol/LdNDPs；2UTaq酶；引物lul；DNA模板20ng/ul。其擴增出的條帶清晰、可靠，

4、重復性好。 3．本試驗選用的800條隨機引物進行篩選，有19條在S10和F104中表現出穩(wěn)定的多態(tài)性，占所選引物的2.3﹪,這說明離子注入誘變并沒有引起誘變體廣泛的變異。 4．本研究初步構建了甜菜的RAPD標記遺傳圖譜，該圖譜中包括5個連鎖群，含15個RAPD標記，總長度僅為202.4cM。 5．離子注入誘變體S10與其他甜菜品種在葉綠素含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白幾個方面比較，初步認為在苗期S10抗旱能力較弱。