Angiopoietin-1通過整合素對間充質干細胞粘附存活和凋亡的影響.pdf

1、目的：探討重組人血管生成素-1(Ang-1)能否通過整合素促進大鼠骨髓間充質干細胞(MSC)粘附和存活、抑制其凋亡，并初步討論其抗凋亡的信號轉導機制。方法：密度梯度離心法結合貼壁分離法體外分離、培養(yǎng)大鼠骨髓MSC并通過流式細胞儀檢查表面抗原做鑒定；在24孔培養(yǎng)板上測定不同時間下Ang-1對MSC的粘附作用；臺盼藍染色法和MTT法測定Ang-1對血清饑餓下MSC的活力影響；紫杉醇誘導MSC凋亡后，Hoechst染色法和Annexin V/

2、PI法檢測Ang-1對MSC凋亡的影響，通過Western blot方法檢測磷酸化Akt、總Akt、Bcl-2、β-actin表達水平的變化，結合整合素抗體和信號轉導阻滯劑來探討其抗凋亡的可能分子機制。 結果：體外成功分離和培養(yǎng)和擴增了MSC，結合細胞形態(tài)、生長特點和流式細胞儀表面抗原檢測均符合MSC特點，其純度達98.3％。粘附試驗顯示在1d、2d、3d三個不同時間點Ang-1均能顯著促進MSC的粘附(均有P<0.01)，該效

3、應能被EDTA、整合素亞單位β1抗體和RGD多肽所抑制(P<0.01)。Ang-1能促進血清饑餓下MSC的存活(1d：P<0.01；2d：P<0.005)、增殖(P<0.01)和拮抗紫杉醇誘導的細胞凋亡(P<0.01)，RGD多肽能抑制Ang-1的上述效應。Ang-1組pAkt和Bcl-2表達上調，RGD多肽能抑制二者的表達(P<0.01)，PI-3K/Akt通路傳導阻滯劑Wortmannin僅能抑制pAkt的表達(P<0.01)，對A