模擬失重對比目魚肌凋亡的影響及藥物干預研究.pdf

1、背景與目的：失重條件下為適應環(huán)境，人和動物生理狀態(tài)會發(fā)生一系列的變化，其中以骨骼肌萎縮最為顯著。目前其發(fā)生的機制仍不明確且缺少特效的干預措施。因此，探討肌肉萎縮的發(fā)生機制對肌萎縮的防治具有重要的意義。PI3K/AKT通路和MAPK通路是膜受體感受外界刺激后向胞內(nèi)傳導信號的主要途徑，也是調(diào)節(jié)細胞分化、增殖、衰老和凋亡的關鍵信號途徑。研究表明上述信號途徑可能參與失重狀態(tài)下骨骼肌萎縮的發(fā)生機制。本研究選用血府逐瘀膠囊和丁苯酞兩種藥物，以尾部懸

2、吊為模擬失重模型，對模擬失重狀態(tài)下骨骼肌的形態(tài)學及PI3K/AKT通路和MAPK通路相關蛋白和基因轉錄水平變化進行研究，以期尋找有效的失重狀態(tài)下骨骼肌萎縮的干預藥物。
　　 實驗方法：建立尾部懸吊大鼠模擬失重模型，40只同源雌性SD大鼠(10周齡，200-250g)隨機分為對照組(CON)，尾吊組(SUS)，尾吊+血府逐瘀膠囊組(XFZY)，尾吊+丁苯酞組(NBP)。尾吊30天，對照組及尾吊組單純給予溶媒，血府逐瘀膠囊組劑量為2

3、5mg/kg.d，丁苯酞組劑量為20mg/kg.d，各組均每日上午八點灌胃一次。
　　 (1)通過測量比目魚肌濕重體質量比，橫截面積，mATP酶染色，觀察形態(tài)學變化。
　　 (2)應用Western-blot及RT-PCR檢測技術分析PI3K/AKT及MAPK通路中ERK、JNK通路相關蛋白及下游分子BAX、Cyto-c蛋白及轉錄水平變化。
　　 (3)分別利用紫外分光光度計和TUNEL方法檢測caspase-3

4、活性和比目魚肌纖維細胞凋亡程度。
　　 實驗結果：40只大鼠全部進入結果分析，無脫失。
　　 (1)與對照組相比，尾吊組比目魚肌濕重體質量比下降了56.39％。血府逐瘀組和丁苯酞組平均濕重體質量比分別較單純尾吊組增加了14.49%和13.85%。血府逐瘀膠囊組與尾吊組差異達統(tǒng)計學顯著差異。尾吊30天后，與對照組相比，其余三組Ⅰ型纖維比例明顯減少，而藥物干預后并未改善Ⅰ型纖維向Ⅱ纖維的轉換。
　　 (2)尾吊30天

5、顯著抑制了PI3K/AKT信號通路中PI3K、P-AKT、GRP78蛋白及轉錄水平表達，增強了磷酸化GSK-3β蛋白表達。血府逐瘀膠囊組干預后提高了PI3K、P-AKT、GRP78蛋白及轉錄水平表達，降低了磷酸化GSK-3β蛋白表達，其中對關鍵分子P-AKT的表達影響最大，與單純尾吊組相比有統(tǒng)計學顯著差異。丁苯酞組干預后，也提高了P-AKT、GRP78蛋白及轉錄水平表達，降低了磷酸化GSK-3β蛋白表達，但丁苯酞對GRP78的蛋白及轉錄

6、水平影響最大。
　　 (3)尾吊30天，抑制了ERK細胞保護通路中P-ERK的蛋白表達，同時增強了促凋亡的JNK通路中P-JNK蛋白表達，兩種藥物干預后可從兩方面檢測到保護作用，并且血府逐瘀膠囊保護作用優(yōu)于丁苯酞組。
　　 (4)尾吊30天比目魚肌caspase3酶活性顯著增強，肌纖維細胞凋亡增加，藥物干預后caspase3酶活性較尾吊組顯著降低，凋亡細胞減少，但仍高于對照組。
　　 結論：
　　 (1)