東北梅花鹿茸生長期頂端組織差異表達基因的篩選和鑒定.pdf

1、鹿茸是哺乳動物中惟一能夠再生的組織器官，因此鹿茸為哺乳動物組織器官再生的研究提供了獨特的模型。研究已表明鹿茸發(fā)育屬軟骨內成骨，其再生基于干細胞而不涉及細胞的去分化;在鹿茸生長過程中，細胞的分化、增殖、凋亡都受到特定基因的表達調控;但其再生及其生長發(fā)育的分子機制迄今還并不十分清楚。
　　本試驗采用mRNA差異顯示PCR技術篩選東北梅花鹿茸生長過程中小鞍子(前期）、二杠茸（中期）和三杈茸（后期）頂端間充質組織的差異表達基因片段，共獲得

2、45條鹿茸生長過程中差異表達片段，回收了15條，其中14條克隆測序，經Blast比對發(fā)現5條序列(EST1、EST2、EST3、EST4和EST5)分別與已知基因(COL9A3、MALAT1、LOX、BCLAF1)高度同源，EST3與EST5來源于LOX基因，其它序列在數據庫中均無同源基因。采用實時定量PCR進一步檢測LOX基因表達水平，與mRNA差異顯示結果基本一致。
　　本試驗初步發(fā)現:COL9A3在鹿茸生長前期不表達，后期的

3、表達量大于中期;MALAT1在鹿茸生長中期表達量最高，前期至中期表達上調，中期至后期表達下調;LOX在鹿茸生長中、后期的表達量大于前期;BCLAF1只在鹿茸生長的后期表達。實時定量結果顯示:鹿茸間充質生長的3個時期，LOX mRNA表達水平呈上調趨勢，中期表達量最高，顯著高于前期(P＜0.05)，后期與前期、中期差異均不顯著（P＞0.05），提示該基因參與鹿茸間充質前期至后期的生長，推測其可能促進了間充質細胞的快速增殖，協(xié)同其它因子使膠