東北梅花鹿鹿茸組織AnxA-1、AnxA-2基因cDNA克隆及表達分析.pdf

1、鹿茸角是雄性梅花鹿的第二性征，它是哺乳動物中唯一可再生器官，在快速生長期，其頂端增殖區(qū)的細胞分裂速度是腫瘤細胞分裂速度的近30倍，這樣的速度是其他哺乳動物組織和器官所無法比擬的，鹿茸組織的細胞增殖、分化、凋亡受到特定基因的表達調(diào)控，但迄今仍無法從根本上闡明鹿茸生長的生物學調(diào)控機制。
　　本試驗以東北梅花鹿(Cervus nippon hortulorum)鹿茸尖端間充質(zhì)組織為材料，以對多種惡性腫瘤細胞起著重要調(diào)節(jié)作用的膜聯(lián)蛋白基因

2、為研究對象，用RT-PCR技術克隆出包含膜聯(lián)蛋白A1(Anxa-1)基因與膜聯(lián)蛋白A2(Anxa-2)基因全部編碼區(qū)的cDNA序列，并運用生物信息學方法及實時熒光定量技術對這兩種基因的氨基酸序列及不同生長時期的表達情況進行了分析。主要研究結果如下：
　　1、東北梅花鹿鹿茸Anxa-1和Anxa-2基因cDNA克隆及生物信息學分析
　　Anxa-1與Anxa-2基因序列測序長度分別為1059bp和1180bp，分別編碼346個

3、氨基酸和339個氨基酸。經(jīng)生物信息學分析，Anxa-1和Anxa-2基因編碼蛋白均為穩(wěn)定蛋白;相對分子質(zhì)量分別為38830.4和38612.0;理論等電點分別為6.17和6.92; Anxa-1蛋白一級結構中亮氨酸占最大比例為10.4％，Anxa-2蛋白一級結構中亮氨酸與賴氨酸占最大比例為10.0％; Anxa-1和Anxa-2蛋白均不具備信號肽，不屬于分泌蛋白;Anxa-1蛋白亞細胞定位于細胞質(zhì)，Anxa-2蛋白亞細胞定位于細胞核;通

4、過對Anxa-1和Anxa-2蛋白的二級結構預測，發(fā)現(xiàn)這兩種蛋白質(zhì)空間結構均由α-螺旋、無規(guī)則卷曲、擴展鏈三部分組成，并成功構建了這兩種蛋白質(zhì)的三維結構。分別對這兩種蛋白質(zhì)氨基酸序列進行多重序列比對，發(fā)現(xiàn)這兩種基因在不同物種間保守性較高，推測其在不同物種間功能相似，通過構建系統(tǒng)進化樹，發(fā)現(xiàn)這兩種基因在進化中分為兩支，一支為哺乳動物類，一支為鳥類，說明這兩種基因均由共同祖先基因進化而來，是重要的功能基因。
　　2、鹿茸不同生長時期A