HBV蛋白與核酸同時(shí)檢測(cè)技術(shù)的建立.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV）是一種DNA病毒，是引起乙型病毒性肝炎的病原體。其基因組為閉合環(huán)狀雙鏈DNA，大小為3.2kb。HBV主要有3種抗原，分別是 HBsAg（表面抗原）、HBcAg（核心抗原）以及 HBeAg（e抗原），其中HBsAg和HBcAg的檢測(cè)在臨床上已廣泛應(yīng)用，但在特異性與靈敏度方面存在不足之處。核酸檢測(cè)是通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)病毒DNA在血液中的含量進(jìn)而推算乙肝病毒顆粒在血液中的含量，達(dá)到病毒含量檢測(cè)的效果。該方

2、法特異性與靈敏度較高，但存在操作相對(duì)繁瑣且成本較高等問(wèn)題。
　　核酸適配體是通過(guò)體外人工進(jìn)化程序（SELEX技術(shù)）篩選得到的一段寡核苷酸，它可以高效、特異地結(jié)合各種不同的配體，如蛋白、小分子化合物、細(xì)胞等，特異性如同抗體一樣。由于其具有靶分子范圍廣、分子質(zhì)量小、免疫原性低、易于化學(xué)合成、易儲(chǔ)存和易修飾等諸多優(yōu)點(diǎn)，因此在醫(yī)學(xué)診斷和治療、藥物分子設(shè)計(jì)以及分析檢測(cè)中具有廣泛的應(yīng)用前景。
　　本實(shí)驗(yàn)以免疫磁珠為載體，捕獲乙肝病人血清

3、中的病毒，利用SELEX技術(shù)從隨機(jī)單鏈DNA文庫(kù)中篩選得到富集的親和配基，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)富集效果，并篩選出與 HBV結(jié)合的核酸適配體，利用篩選出的 HBV適配體進(jìn)行HBV蛋白檢測(cè)。同時(shí)比對(duì) HBV全基因組序列，找到相對(duì)保守區(qū)序列，利用primer premier5.0軟件設(shè)計(jì)出相應(yīng)引物和taqman探針進(jìn)行HBV基因檢測(cè)。
　　通過(guò)研究，本實(shí)驗(yàn)確定了免疫磁珠可以捕獲乙肝病人血清中的病毒，并以此為基礎(chǔ)通過(guò)13輪SELEX