5-氮胞苷對HSG細胞的增殖抑制作用.pdf

1、做了以下幾個方面的工作:1用5umol/L、10umol/L的5-azaC處理HSG細胞后,細胞的生長狀態(tài)發(fā)生了變化.部分細胞從瓶底脫落到培養(yǎng)液中,從生長曲線上可以看到細胞生長受到抑制,抑制率分別為82％和95%,瓊脂克隆試驗表明加入5umol/L 5-azaC處理后細胞克隆形成率降低,由39.7%降為19.6%,細胞分裂指數(shù)檢測表明5-azaC處理后細胞分裂指數(shù)降低,由21.6%變?yōu)?2.6%,細胞周期檢測發(fā)現(xiàn)細胞周期主要被阻斷在G1

2、期,免疫組化染色發(fā)現(xiàn)5-azaC處理后PCNA和CyclinD1表達較處理前減弱,嗜銀蛋白染色分析表明5-azaC處理后嗜銀蛋白顆粒減少.HSG細胞用5-azaC處理后接種到裸鼠皮下,與對照組相比,5-azaC處理組細胞成瘤性降低,腫瘤的重量由0.5510±0.1188g降為0.1395±0.0214g.以上結果都表明5-azaC可以抑制HSG細胞的生長.2用5umol/L 5-azaC處理HSG后,細胞形態(tài)發(fā)生了一些變化,胞漿中出現(xiàn)類

3、似顆粒狀物,RT-PCR產物檢測結果可見用5-azaC處理后在201bp處出現(xiàn)光亮條帶,而對照組則未見到,說明HSG細胞可能分化成了腺泡細胞.3 5umol/L 5-azaC處理HSG 24h、48h、72h后進行流式細胞儀檢測,結果發(fā)現(xiàn)5-azaC處理后,HSG細胞G1期前面出現(xiàn)亞二倍體峰,光鏡觀察可見部分細胞有出芽、發(fā)泡現(xiàn)象,細胞體積縮小,電鏡觀察可見核內染色質濃縮,形成染色質塊聚集在核的邊緣,或形成指環(huán)平鋪在核膜下.胞質回縮,細胞

4、膜發(fā)泡,出現(xiàn)凋亡小體.4 5umol/L 5-azaC可以使HSG細胞發(fā)生凋亡,免疫組化結果顯示用5-azaC處理后HSG細胞FAP-1表達減弱,說明FAP-1在5-azaC誘導的HSG凋亡中起一定作用.瓊脂糖電泳結果可見5-azaC處理后形成DNA ladder,Western blot結果顯示5-azaC處理后,FAP-1蛋白表達降低.將HSG進行FAP-1反義寡核苷酸轉染,轉染后,HSG細胞形態(tài)未發(fā)生明顯變化,RT-PCR產物凝膠

5、電泳可見607bp附近出現(xiàn)光亮條帶,說明FAP-1反義寡核苷酸己成功轉入HSG細胞,用5-azaC處理轉染FAP-1反義寡核苷酸的HSG細胞后,細胞凋亡數(shù)較轉染前增加.以上結果說明FAP-1在5-azaC誘導的HSG細胞凋亡中起一定作用.另外,5-azaC處理后,bcl-2和p53表達減弱,說明bcl-2和p53也可能與5-azaC誘導的HSG細胞的凋亡有關.上述研究結果表明,5-azaC具有抑制HSG細胞增殖的作用,能誘導HSG細胞使