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文檔簡介
1、目的:探討5-Aza-CdR對人肝癌細胞株HepG2細胞中T-cadherin基因啟動子甲基化狀態(tài)改變及細胞增殖、T-cadherin/β-catenin mRNA及蛋白表達的影響。
方法:用5-Aza-CdR處理體外培養(yǎng)的人肝癌細胞株HepG2細胞,采用MTT法檢測不同濃度5-Aza-CdR分別作用1、2、3、4、5、6d后細胞增殖情況;采用甲基化特異性PCR(MSP)法分析藥物處理前后T-cadherin基因啟動子CpG島
2、甲基化狀態(tài)變化;應用RT-PCR技術(shù)及Western-blot法檢測對照組和實驗組中T-cadherin/β-catenin基因mRNA及蛋白的表達。
結(jié)果:MTT法檢測發(fā)現(xiàn)經(jīng)過不同濃度5-Aza-CdR作用后,濃度在1μmol/L以下時,細胞生長曲線仍呈快速上升趨勢,當藥物濃度上升至2μmol/L時,細胞生長速度較對照組細胞明顯減慢且抑制作用具有時間、劑量依賴。4μmol/L的該藥處理HepG2細胞五天后,細胞生長抑制率達5
3、0.84%;MSP法檢測經(jīng)4μmol/L5-Aza-CdR處理五天的HepG2細胞,對照組T-cadherin基因啟動子區(qū)域用甲基化引物擴增出目的基因帶,去甲基化引物沒有擴增出目的基因帶,即T-cadherin基因甲基化陽性。而實驗組T-cadherin基因用去甲基化引物擴增出目的基因帶,但甲基化引物擴增出目的基因帶十分弱,即提示5-Aza-CdR作用后,T-cadherin基因去甲基化陽性。RT-PCR技術(shù)及Western-blot法
4、檢測經(jīng)4μmol/L5-Aza-CdR處理五天后的HepG2細胞,對照組T-cadherin mRNA及蛋白為陰性表達,而實驗組HepG2細胞可檢測到T-cadherin mRNA及蛋白表達,同時β-catenin mRNA及蛋白表達水平明顯低于對照組,差別具有明顯統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結(jié)論:1、T-cadherin基因在人肝癌細胞株HepG2細胞中表達缺失,其與該基因啟動子甲基化有關,可能是原發(fā)性肝癌發(fā)生發(fā)展的原因之
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