臺(tái)州市農(nóng)村地區(qū)結(jié)核病流行特征及結(jié)核桿菌基因分型研究.pdf

1、結(jié)核病(tuberculosis TB)主要是由于感染結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis M.TB)引起的一種嚴(yán)重危害人民健康的呼吸道傳染病，被列為我國(guó)重大傳染病之一。由于耐藥結(jié)核病的出現(xiàn)、結(jié)核病控制措施的減弱以及艾滋病(HIV/AIDS)的流行，在20世紀(jì)80年代結(jié)核病重新復(fù)發(fā)流行，1993年WHO宣布全球結(jié)核病處于緊急狀態(tài)。WHO估計(jì)每年有800萬(wàn)人患結(jié)核病，每年有200萬(wàn)人死于結(jié)核病。我國(guó)自1991年

2、起實(shí)施直接監(jiān)督短程化療法(directly observedtreatment short-course，DOTC)，從2001年開始，全面推行了現(xiàn)代結(jié)核病控制策略，10年間全國(guó)共發(fā)現(xiàn)并治療肺結(jié)核患者829萬(wàn)例，其中涂陽(yáng)肺結(jié)核患者450萬(wàn)例，避免了4000多萬(wàn)健康人感染結(jié)核菌。2010年全國(guó)涂陽(yáng)肺結(jié)核患病率降至66/10萬(wàn)，比2000年下降了61％。
　　然而我國(guó)結(jié)核病防治工作還面臨著諸多新的問(wèn)題與挑戰(zhàn)。我國(guó)仍是全球22個(gè)結(jié)核病高

3、負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，WHO評(píng)估，目前我國(guó)結(jié)核病年發(fā)病人數(shù)約為130萬(wàn)，占全球發(fā)病人數(shù)的14％，位居全球第二位。近年來(lái)，我國(guó)每年報(bào)告肺結(jié)核發(fā)病人數(shù)約100萬(wàn)，始終位居全國(guó)甲乙類傳染病的前列;耐多藥肺結(jié)核危害日益凸顯，每年新發(fā)患者人數(shù)約12萬(wàn)，未來(lái)數(shù)年內(nèi)可能出現(xiàn)以耐藥菌為主的結(jié)核病流行態(tài)勢(shì);結(jié)核菌/艾滋病病毒雙重感染患者人數(shù)持續(xù)增加，防治工作亟待加強(qiáng);中西部地區(qū)、農(nóng)村地區(qū)結(jié)核病防治形勢(shì)嚴(yán)峻。我國(guó)現(xiàn)行結(jié)核病防治服務(wù)體系和防治能力還不能滿足新形勢(shì)下防

4、治工作的需要，防治基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)滯后，基層防治力量薄弱，流動(dòng)人口患者治療管理難度加大，公眾對(duì)結(jié)核病危害的認(rèn)識(shí)不足，防治任務(wù)尤其是農(nóng)村地區(qū)仍然十分艱巨，需要長(zhǎng)期不懈的努力。
　　本研究以臺(tái)州市農(nóng)業(yè)縣-仙居縣實(shí)施結(jié)核病DOTC控制項(xiàng)目縣為研究現(xiàn)場(chǎng)，采用現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)方法對(duì)當(dāng)?shù)乜h級(jí)疾控中心結(jié)核病防治所2011年4月～2012年3月登記的所有痰培養(yǎng)陽(yáng)性的結(jié)核病患者進(jìn)行系統(tǒng)的研究，通過(guò)收集患者的基本信息，采集患者的痰液進(jìn)行抗酸染

5、色鏡檢，對(duì)所有痰標(biāo)本分離培養(yǎng)結(jié)核菌，以比例法對(duì)分離的M.TB進(jìn)行兩種一線抗結(jié)核菌藥物敏感試驗(yàn)(RFP和INH)，采用15位點(diǎn)MIRU-VNTR基因分型方法對(duì)所有的M.TB進(jìn)行基因分型，用BioNumerics軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行聚類分析，同時(shí)用多重PCR方法檢測(cè)RD105片段是否缺失來(lái)區(qū)分北京基因型和非北京基因型菌株，掌握臺(tái)州市農(nóng)村地區(qū)M.TB的流行菌株和藥物敏感情況，以及該地區(qū)的M.TB的基因多態(tài)性。分析臺(tái)州市農(nóng)村地區(qū)結(jié)核病的基本特征及可能

6、傳播途徑，為臺(tái)州市農(nóng)村地區(qū)的結(jié)核病預(yù)防與控制提供科學(xué)依據(jù)。
　　主要結(jié)果和結(jié)論如下
　　1.結(jié)核病基本流行特征
　　本次納入研究對(duì)象共89人，男性67人，占75.3％，女性22人，占24.7％。結(jié)核患者的平均年齡為51.4±18.2歲，最大88歲，最小15歲，中位數(shù)為52歲，其中30～60年齡段人數(shù)最多，為44人，占49.4％，其次是≥60年齡段31人，占34.8％。職業(yè)以農(nóng)民為最多，73人，占82％，非農(nóng)民16人，占

7、18％。初治患者78人，占87.6％，復(fù)治患者11人，占12.4％。本地病例79人，占88.8％，外地病例10人占11.2％。痰涂片陽(yáng)性的47例，占51.7％，陰性42例，占48.3％。
　　2.結(jié)核患者結(jié)核桿菌分離及耐藥情況
　　從所有患者中共分離到M.TB80株，占89.9％;鳥-胞內(nèi)分枝桿菌8株，占9.0％;堪薩斯分枝桿菌1株，占1.1％。80株M.TB菌中對(duì)INH或RFP單一耐藥有7株，占8.8％，均為初治患者;對(duì)I

8、NH和RFP均耐藥率有6株，占7.5％，其中3例為復(fù)治患者。11例復(fù)治患者中4例分離出鳥-胞內(nèi)分枝桿菌，7例分離出M.TB有3例耐多藥。
　　3.不同治療史患者M(jìn).TB藥敏結(jié)果比較
　　80例分離出M.TB的結(jié)核病患者中初治患者74例，占92.5％;復(fù)治患者6例，占7.5％。74例初治患者中對(duì)INH和RFP均敏感的有64例，占86.5％(95％CI76.5％～93.3％)，對(duì)藥物耐藥的有10例，占13.5％(95％CI6.7

9、％～23.5％);6例復(fù)治患者中對(duì)INH和RFP均敏感的有3例，占50.0％(95％CI11.8％～88.2％)，對(duì)藥物耐藥的有3例，占50.0％(95％CI11.8％～88.2％)。初治患者和復(fù)治患者在總耐藥率方面（敏感vs耐藥）無(wú)顯著性差異(x2=3.08，P=0.051＞0.05)，初治患者和復(fù)治患者在耐藥類型（單耐藥vs耐多藥）方面無(wú)顯著性差異(x2=4.55，P=0.102＞0.05)。
　　4.M.TB不同基因型鑒定及

10、藥敏結(jié)果比較
　　80株M.TB中北京基因型菌株39株，占48.7％;非北京基因型菌株41株，占51.3％。39株北京基因型菌株中對(duì)INH和RFP均敏感的有33例，占84.6％(95％CI69.5％～94.1％)，對(duì)藥物耐藥的有6例，占15.4％(95％CI5.9％～30.1％);41株非北京基因型菌株中對(duì)INH和RFP均敏感的有34例，占82.9％(95％CI67.9％～92.8％)，對(duì)藥物耐藥的有7例，占17.1％(95％CI

11、7.2％～32.1％)。北京基因型和非北京基因型菌株在總耐藥率方面（全敏感vs耐藥）無(wú)顯著性差異(x2=0.04，P=0.838＞0.05)，北京基因型和非北京基因型菌株在耐藥類型方面（單耐藥vs耐多藥）也無(wú)顯著性差異(x2=1.93，P=0.380＞0.05)。
　　5.耐藥結(jié)核病影響因素分析
　　單因素logistic分析發(fā)現(xiàn)復(fù)治與MDR-TB人群分布有關(guān)(P＜0.05)，年齡、性別、職業(yè)、戶籍、治療史、痰涂片、菌株基因

12、型等因素與單耐藥病人人群分布均無(wú)明顯的關(guān)聯(lián)。多因素logistic研究分析發(fā)現(xiàn)結(jié)核病人的既往治療史與耐多藥病人的人群分布有關(guān)，復(fù)治的結(jié)核病人是發(fā)生耐多藥結(jié)核病的主要人群(復(fù)治/初治:OR:15.854;95％CI:1.866～134.677)。
　　6.M.TB基因分型情況
　　采用15個(gè)MIRU-VNTR位點(diǎn)對(duì)80株M.TB的分辨力最高的是MIRU26(HGI=0.865)，分辨力最低的是ETRC(HGI=0.165)，H

13、GI＞0.5的有10個(gè)位點(diǎn)。
　　15位點(diǎn)MIRU-VNTR基因分型結(jié)果顯示80株M.TB共得到78個(gè)基因型，76株有獨(dú)立基因型，另外4株兩兩成簇，成簇率為2.5％。經(jīng)Bionumberics5.0軟件聚類分析，可78個(gè)基因型分為8個(gè)基因群（Ⅰ群、Ⅱ群、Ⅲ群、Ⅳ群、Ⅴ群、Ⅵ群、Ⅶ群、Ⅷ群）。分別為Ⅰ群占8.75％，含7個(gè)基因型;Ⅱ群占11.25％，含8個(gè)基因型;Ⅲ群占55.0％，含43個(gè)基因型;Ⅳ群占6.25％，含5個(gè)基因型;Ⅴ群

14、占2.5％，含2個(gè)基因型;Ⅵ群占8.75％，含7個(gè)基因型;Ⅶ群占5.0％，含4個(gè)基因型;Ⅷ群占2.5％，含2個(gè)基因型。
　　臺(tái)州市農(nóng)村地區(qū)結(jié)核病呈低水平流行，M.TB的耐藥率低于全國(guó)水平，初治患者和復(fù)治患者在總耐藥率方面無(wú)顯著性差異，M.TB中以非北京基因型為優(yōu)勢(shì)菌，北京基因型呈低流行，北京基因型和非北京基因型菌株在總耐藥率方面無(wú)顯著性差異，15位點(diǎn)MIRU-VNTR基因分型結(jié)果顯示菌株間成簇率低，基因多態(tài)性明顯，說(shuō)明該地區(qū)的結(jié)核