胰淀素對脂肪變性人L-02肝細胞甘油三酯代謝的影響.pdf

1、胰淀素(Amylin)又稱胰島淀粉樣多肽(islet amyloid polypeptide，IAPP)，由PerWesterwark等于1987年首次在2型糖尿病患者的胰島淀粉樣蛋白沉積及正常胰島細胞中發(fā)現(xiàn)并確認，由37個氨基酸組成，與胰島素一起由胰島β細胞合成與分泌。胰淀素與2型糖尿病關系密切，不僅參與胰島素抵抗的發(fā)生，并且能與胰島素和胰高血糖素一起調節(jié)人體血糖平衡。胰淀素還能通過刺激后極區(qū)的特異性胰淀素受體將中央信號傳遞到下丘腦外

2、側區(qū)和其他下丘腦區(qū)域，增加餐后飽食感而減少進食，以及減緩胃排空等。
　　目前關于胰淀素的研究主要集中在糖代謝上面，對脂代謝作用的研究很少，并且意見不一致。在先前的兩個研究中發(fā)現(xiàn)，胰淀素對大鼠脂肪細胞的脂肪合成與分解都沒有影響，這就導致產生了一種錯覺，胰淀素對脂代謝沒有直接影響，盡管Suzuki等證明胰淀素對培養(yǎng)的大鼠肝細胞具有促進脂肪生成的作用。近年來實驗證明，無論是DIO肥胖大鼠還是瘦HSD大鼠，胰淀素灌注均能引起一定程度的體重

3、減輕（～10％）和甘油三酯含量下降，并且胰淀素與瘦素聯(lián)合使用效果更好，優(yōu)于胰淀素與瘦素單獨使用，Ye等通過實驗證明胰淀素具有促進脂肪分解的作用。目前尚不能確定胰淀素對脂質代謝的直接影響。甘油三酯是人體內含量最多的脂肪，而肝臟是體內參與脂質代謝的重要場所，肝細胞脂質代謝紊亂是很多代謝疾病的起始因素，所以本實驗通過構建人L-02肝細胞脂肪變性模型來研究胰淀素對甘油三酯代謝的影響。
　　本研究目的：
　　1.觀察胰淀素對脂肪變性人

4、L-02肝細胞甘油三酯代謝的影響及其可能機制。
　　2.觀察胰淀素與瘦素聯(lián)合使用對脂肪變性人L-02肝細胞甘油三酯代謝的影響及其可能機制。
　　方法：
　　1.用50％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基孵育人L-02肝細胞72h，建立肝細胞脂肪變性模型，并用油紅O染色鑒定。
　　2.實驗分組:正常肝細胞組、脂肪變性人L-02肝細胞組、0.01μmol/l胰淀素處理脂肪變性肝細胞組、0.1μmol/l胰淀素處理脂肪變性肝

5、細胞組、1μmol/l胰淀素處理脂肪變性肝細胞組、5μmol/l胰淀素處理脂肪變性肝細胞組、瘦素處理組和胰淀素+瘦素聯(lián)合處理脂肪變性肝細胞組。
　　3.油紅O染色、甘油三酯定量檢測試劑盒及熒光定量RT-PCR技術分別檢測各組肝細胞內甘油三酯含量及與甘油三酯代謝相關的脂肪酸合成酶mRNA和乙酰輔酶A羧化酶mRNA表達情況。
　　結果：
　　1.50％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基孵育人L-02肝細胞72h，成功建立肝細胞脂

6、肪變性模型，油紅O染色發(fā)現(xiàn)肝細胞變大，輪廓不清，胞漿內有大量紅色的脂滴。
　　2.脂肪變性人L-02肝細胞組與正常肝細胞組相比，胞漿內存在大量紅色脂滴，細胞內甘油三酯含量明顯增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，脂肪酸合成酶mRNA和乙酰輔酶A羧化酶mRNA表達增加。
　　3.不同濃度胰淀素處理脂肪變性人L-02肝細胞組與脂肪變性人L-02肝細胞組相比，胞漿內紅色脂滴數(shù)量明顯減少，細胞內甘油三酯含量明顯下降，差異具有統(tǒng)計

7、學意義(P＜0.05)，脂肪酸合成酶mRNA和乙酰輔酶A羧化酶mRNA表達有不同程度下降。
　　4.瘦素處理脂肪變性肝細胞組和胰淀素+瘦素聯(lián)合處理脂肪變性肝細胞組與脂肪變性肝細胞組相比，胞漿內紅色脂滴數(shù)量明顯減少，細胞內甘油三酯含量顯著下降，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，脂肪酸合成酶mRNA和乙酰輔酶A羧化酶mRNA表達有不同程度下降。
　　結論：
　　1.50％胎牛血清孵育正常肝細胞72h，可成功制備肝細胞脂肪