蘋果DELLA相關基因的克隆及功能初步鑒定.pdf

1、柱型蘋果作為蘋果生產(chǎn)中的豐產(chǎn)樹型之一，是蘋果高度密植栽培的理想品種。決定柱型蘋果遺傳特性的柱型基因Co與調控樹型發(fā)育的重要內源激素——赤霉素(GA)之間的關系是蘋果柱型突變分子機制研究的熱點問題。 本試驗以柱型蘋果“威賽克”及非柱型蘋果“旭”為試材，利用蘋果DELLA相關基因的序列信息設計了特異引物，通過PCR擴增克隆目的基因。將目的基因插入至pCAMBIA1305．1植物表達載體中，農(nóng)桿菌EHA105介導的葉盤法轉化本生煙，并

2、通過PCR、RT-PCR以及GUS染色法檢測轉基因植株；將目的基因插入至GFP瞬時表達載體pEZ-NL，中，通過基因槍法，轉入洋蔥表皮細胞，在激光共聚焦顯微鏡下觀察目的基因蛋白的亞細胞定位。試驗結果如下： 1．從蘋果“威賽克”和“旭”中克隆了2個與DELLA相關的基因——MdRGL1a、MdRGL2a，長度分別為1920bp、1743bp。經(jīng)DNAMAN軟件分析，威賽克、旭的MdRGL1a，威賽克、旭的MdRGL2a核苷酸序列同

3、源性為100％;所推測的氨基酸序列均含有．DEllA蛋白家族所特有的結構區(qū)域。初步表明這兩個基因在蘋果不同品種間高度同源，與蘋果威賽克的柱型突變無關。 2．構建了植物表達載體pRGL1a-GUS、pRGL2a-GUS，MdRGL1a、MdRGL2a轉基因植株分別經(jīng)潮霉素篩選，以及PCR、RT-PCR檢測、GUS染色驗證．MdRGL1a、MdRGL2a基因成功轉入煙草植株中。 3．構建得到GFP瞬時表達載體pRGL1a-G