荔枝核總黃酮對肝纖維化大鼠肝臟p300-CBP蛋白表達的影響.pdf

1、目的:研究荔枝核總黃酮(Total Flavone from Litchi ChinensisSonn，TFL)對二甲基亞硝胺(Dimethylnitrosamine，DMN)肝纖維化大鼠肝細胞凋亡機制TGF-β/Smads信號通路中p300、CBP和Smad3蛋白表達的影響及其與肝纖維化程度的相關(guān)性。
　　方法:將SPF級雄性SD大鼠90只，隨機分為空白對照組、肝纖維化模型組、秋水仙堿組、TFL高劑量給藥組(200mg/kg·d

2、)、TFL中劑量給藥組（100mg/kg·d），TFL低劑量給藥組(50mg/kg·d)，每組各15只。以DMN腹腔注射制備大鼠肝纖維化模型，造模同時分別以秋水仙堿、高、中、低劑量的TFL灌胃進行干預(yù)治療，空白對照組及肝纖維化模型組分別以生理鹽水(5ml/kg)灌胃進行對照。6周后處死大鼠，各組取大鼠肝組織標本，HE及Masson染色觀察肝纖維化嚴重程度，實時熒光定量PCR檢測Smad3 mRNA表達變化，免疫組織化學(xué)染色檢測p300、

3、CBP、Smad3表達變化，Western blot定量測定p300、CBP表達變化。
　　結(jié)果:
　　1）病理組織觀察:大鼠肝纖維化造模成功，肝纖維化半定量評分提示TFL高中低劑量組和秋水仙堿組肝纖維化半定量評分較模型組低(p＜0.01)，TFL高中劑量組較秋水仙堿組肝纖維化半定量評分低(p＜0.05)，但TFL低劑量組較與水仙堿組相比，肝纖維化半定量評分無顯著差別(p＞0.05)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2)Sma

4、d3測定:免疫組化結(jié)果顯示模型組Smad3顯色指數(shù)評分顯著高于空白對照組(p＜0.01)，TFL高、中、低各組和秋水仙堿組較模型組Smad3表達均有所減少(p＜0.01);與秋水仙堿組比較，TFL高、中劑量組Smad3表達較低(p＜0.05); TTL低劑量組Smad3表達較秋水仙堿稍低，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。
　　3)qPCR結(jié)果顯示，模型組Smad3的表達較空白對照組明顯升高(p＜0.01）;藥物干預(yù)的TFL高、中

5、、低組和秋水仙堿組Smad3表達較模型組顯著降低(p＜0.01)，與秋水仙堿組比較，TFL各劑量組Smad3表達較低(p＜0.05）。
　　4）p300、CBP測定:免疫組化染色顯示:p300/CBP蛋白主要在肝竇、匯管區(qū)附近細胞的細胞質(zhì)及細胞核中分布，但以分部在細胞核中為主。相對于空白對照組，模型組p300/CBP表達明顯升高(p＜0.01);與模型組比較，TFL高、中、低劑量組和秋水仙堿組p300/CBP表達明顯減弱（p＜0.

6、01）;與秋水仙堿組比較，TFL高、中劑量組p300/CBP表達較低(p＜0.05); TFL低劑量組降低p300/CBP表達的作用較秋水仙堿組優(yōu)勢并不明顯。Westernblot結(jié)果顯示，空白對照組大鼠肝組織中p300/CBP僅少量表達;模型組大鼠肝臟中p300/CBP大量表達，較空白對照組明顯升高(p＜0.01)。其余各組表達與免疫組化結(jié)果基本一致。
　　5）相關(guān)性:肝組織p300、CBP和Smad3蛋白的表達與肝纖維化程度呈

7、正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.888，r=0.880, r=0.875(p＜0.01)。
　　結(jié)論:高、中劑量的TFL具有良好的抗肝纖維化作用，其抗肝纖維化作用機制可能與其抑制p300/CBP、Smad3蛋白表達，進而影響TGF-β/Smads信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，從而促進肝星狀細胞凋亡有關(guān)，且肝纖維化程度與p300/CBP、Smad3蛋白的表達呈正相關(guān)。荔枝核總黃酮有望成為有效的中藥單體制劑藥物用于肝纖維化的治療，但仍需要迸一步的研