基因槍介導的抗體-乳鐵蛋白融合基因和RNAi片段轉化小麥的研究.pdf

1、小麥是一種在世界上廣泛種植的糧食作物，對人類糧食供應起著至關重要的作用。然而，由于赤霉病的危害，小麥產(chǎn)量往往會受到嚴重影響。小麥赤霉病(FusariumHead Blight，F(xiàn)HB)是由禾谷鐮刀菌引起的真菌病害，給我國南方麥區(qū)，特別是長江中下游地區(qū)的小麥生產(chǎn)帶來了很大損失。小麥感染赤霉病后，不僅使產(chǎn)量和品質下降，而且由于病菌的代謝產(chǎn)物中含有毒素，人畜食用后還會中毒，危害人、畜健康。采用傳統(tǒng)的小麥育種方法來降低赤霉病對小麥的危害，雖然也

2、可以取得一定成效，但由于小麥種質資源中抗赤霉病資源匱乏，使培育高抗赤霉病小麥新品種難度較大。針對這一難題，本研究借助基因槍介導法，將赤霉病抗性基因導入小麥，篩選獲得抗赤霉病小麥植株，為選育抗赤霉病小麥新品種和分析抗性機理提供材料，具有理論意義和應用價值。
　　本研究選用赤霉病抗性基因 BLF-A6、RNAi-chs3、RNAi-pkc-chs3、plsAs6-chs3bAs1及pkcAs3-chs3bAs1等，經(jīng)基因槍轟擊導入小麥

3、品種襄麥76，經(jīng)鑒定獲得了含有上述基因的轉基因植株。主要結果如下:
　　1.抗體-乳鐵蛋白融合基因BLF-A6和RNAi-chs3轉化襄麥76。利用多基因共轉化技術，將含有BLF-A6、RNAi-chs基因的最小表達框和篩選標記基因Bar導入襄麥76，在Bialaphos篩選壓存在下生長的抗性植株，經(jīng)PCR鑒定后共獲得4株T0代陽性植株;其中3個T0代單株在后代得以穩(wěn)定遺傳并同時含有兩個基因，1個T0代在T1代中基因BLF-A6發(fā)

4、生分離，只含有一個目的基因RNAi-chs3，它們均能穩(wěn)定遺傳。這批轉化材料目前已處于T3代。
　　2.抗體-乳鐵蛋白融合基因BLF-A6和RNAi-pkc-chs3轉化襄麥76。將這個基因組合和篩選標記6-磷酸異構酶基因PMI的最小表達框混合，以基因槍介導法轉入小麥，經(jīng)過甘露糖篩選和PCR鑒定共獲得2個T0代植株，均只含有抗體-乳鐵蛋白融合基因BLF-A6。目前這批轉化材料處于T2代。
　　3.抗體-乳鐵蛋白融合基因BLF

5、-A6、plsAs6-chs3bAs1和pkcAs3-chs3bAs1轉化襄麥76。同上以基因槍介導的遺傳轉化方法，將上述三個基因和篩選標記基因PMI的最小表達框一起導入小麥，在甘露糖存在條件下篩選，經(jīng)PCR鑒定，共獲得了5個T0代陽性植株，其中2株含有上述所有三個基因，3株含有兩個基因plsAs6-chs3 bAs1、pkcAs3-chs3bAs1。葉片接種赤霉菌的結果表明，轉基因植株赤霉病抗性顯著提高。這批材料目前也處于T2代。