廣東潮汕人群MMP15基因及TGFβ2基因多態(tài)性與慢性阻塞性肺疾病的相關性研究.pdf

1、第一部分：
　　研究背景和目的：
　　慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種具有氣流受限不完全可逆特征且呈進行性發(fā)展的疾病，與氣道和肺部對有害顆?；蛴泻怏w的慢性炎癥反應增強相關。COPD發(fā)病機制復雜，與多個基因變異及環(huán)境因素相互作用有關。人類基因組計劃和HapMap的完成使COPD這類復雜疾病的遺傳學GWAS（全基因組關聯研究）成為現實。肺通氣功能是評

2、價氣流受限程度的客觀指標以及COPD的重要表型，肺功能相關的基因位點也是COPD的重要候選基因。2012年Soler Artigas等發(fā)表了最新的肺功能GWAS數據，其中MMP15基因rs12447804位點與FEV1/FVC顯著相關（P<5×10-8）。MMP15基因rs12447804位點是基質金屬蛋白酶家族中第一個被報道的與肺功能相關的基因位點。
　　MMPs/TIMPs平衡失調在COPD發(fā)病中的作用不容忽視，MMP15屬于

3、基質金屬蛋白酶家族，與家族中其他的MMPs一樣具有廣泛的蛋白水解活性。當MMP15基因的改變引起其活性變化，影響蛋白酶-抗蛋白酶間的平衡狀態(tài)時，可能會導致COPD的發(fā)生。本研究通過對廣東潮汕地區(qū)158例漢族人MMP15基因多態(tài)性與COPD易感性的研究，以期能篩選出COPD的易感基因。
　　研究對象和方法：
　　在汕頭大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院篩選158例COPD患者和沒有任何呼吸系統疾病的201例健康體檢者，所收集的COPD患者

4、均符合2011年發(fā)表的全球COPD創(chuàng)議（GOLD指南）制訂的慢性阻塞性肺疾病診斷標準。所有受試者及其三代直系親屬均為潮汕籍人。抽取所有研究對象外周血2-3ml，提取血液白細胞DNA，采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法檢測兩組研究對象MMP15基因rs12447804位點等位基因和基因型，同時收集兩組樣本的臨床和實驗室指標，對所有數據進行統計學分析。
　　結果：
　　1. MMP15基因rs124

5、47804位點C/T多態(tài)性在潮汕地區(qū)正常人群中的分布為：CC型32.4％、CT型53.2%，TT型14.4%，等位基因C：59%、T：41%，男女之間基因型及等位基因頻率無顯著差異（P<0.05）。與中國北京地區(qū)、日本和拉丁裔美國人群沒有顯著性差異，但與歐洲、非洲和非裔美國人群相比差異顯著（P<0.01）
　　2. COPD組與對照組對比，MMP15基因 rs12447804C/T多態(tài)位點等位基因分布無明顯統計學差異（P=0.05

6、4），而基因型分布差異具有統計學意義（P=0.048），但經年齡、性別、BMI、吸煙指數矯正后，基因型分布在兩組間無明顯差異（P=0.087）。共顯性遺傳模式下，與CC基因型相比，COPD組中TT基因型頻率與對照組相比略增高（P=0.05, OR2.098,95%CI:1.000-4.399），統計學差異不顯著。隱形遺傳模式下，與CC+CT基因型相比，COPD組中TT基因型頻率與對照組相比明顯增高（P=0.027,OR2.099,95%

7、CI:1.089-4.048）。顯性遺傳模式下，與 CC基因型相比，COPD組中 CT+TT基因型頻率與對照組無差異（P=0.474）。
　　3. COPD組不同基因型患者間性別組成、年齡、吸煙指數、肺功能指標（FEV1及FEV1/FVC）、呼吸困難程度（mMRC評分）的比較上無明顯差異，但體重指數（BMI）在三組間的比較具有統計學意義（CC vs CT: P=0.008）。不同GOLD分組間比較，三種基因型的分布無明顯差異。

8、r>　　結論：
　　1.廣東潮汕地區(qū)正常人群MMP15基因rs12447804位點C/T多態(tài)性在男女之間基因型及等位基因頻率無顯著差異，與中國北京地區(qū)、日本和拉丁裔美國人群相比沒有明顯統計學差異，但與歐洲、非洲和非裔美國人群相比差異顯著。
　　2. MMP15基因rs12447804位點C/T多態(tài)性和廣東潮汕人群COPD的發(fā)病相關。攜帶C基因可明顯較少COPD的發(fā)病風險。與CC基因型相比，TT基因型明顯增加慢性阻塞性肺病的發(fā)

9、病風險，TT基因型可能是慢性阻塞性肺病的遺傳學危險因素。
　　3. MMP15基因rs12447804位點C/T多態(tài)性和COPD的病情嚴重程度可能無相關。
　　4. COPD患者體重指數較正常人群明顯降低，其中CT基因型患者的體重指數較CC型組明顯減少，營養(yǎng)水平降低，說明其病情及臨床體征可能較CT型患者更加嚴重。BMI能作為預測患者發(fā)生慢性阻塞性肺病的獨立危險因素。
　　第二部分：
　　研究背景和目的：
　

10、　慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種具有氣流受限不完全可逆特征且呈進行性發(fā)展的疾病，與氣道和肺部對有害顆?；蛴泻怏w的慢性炎癥反應增強相關。COPD發(fā)病機制復雜，與多個基因變異及環(huán)境因素相互作用有關。人類基因組計劃和HapMap的完成使COPD這類復雜疾病的遺傳學GWAS（全基因組關聯研究）成為現實。肺通氣功能是評價氣流受限程度的客觀指標以及COPD的重要表型，

11、肺功能相關的基因位點也是COPD的重要候選基因。2012年Soler Artigas等發(fā)表了最新的肺功能GWAS數據，其中TGFβ2基因rs993925位點與FEV1/ FVC顯著相關（P<5×10-8），之后Cho MH等對多個全基因組關聯分析結果進行數據分析，共包括6633位中到重度COPD患者和5704位對照組個體，最新發(fā)現TGFβ2基因和COPD顯著相關（P<8.3×10-9）。
　　轉化生長因子-β（TGF-β）是參與C

12、OPD慢性炎癥反應的一種炎癥介質。TGFβ2的過多表達會促進氣道的細胞外基質中膠原蛋白沉積而導致氣道重塑，因此當TGFβ2基因單核苷酸多態(tài)性影響其表達水平的變化時，可能會在COPD的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。目前國內還沒有相關文獻研究TGFβ2基因rs993925位點與COPD易感性的關聯，本研究通過病例-對照研究方法來了解TGFβ2基因多態(tài)性在廣東潮汕人群的分布特點，初探其與COPD的發(fā)病及病情嚴重程度的相關性。
　　研究對象和方法：

13、
　　在汕頭大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院篩選158例COPD患者和沒有任何呼吸系統疾病的201例健康體檢者，所收集的COPD患者均符合2011年發(fā)表的全球COPD創(chuàng)議（GOLD指南）制訂的慢性阻塞性肺疾病診斷標準。所有受試者及其三代直系親屬均為潮汕籍人。抽取所有研究對象外周血2-3ml，提取血液白細胞DNA，采用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法檢測兩組研究對象TGFβ2基因rs993925 G/A位點等位基因

14、和基因型，同時收集兩組樣本的臨床和實驗室指標，對所有數據進行統計學分析。
　　結果：
　　1. TGFβ2基因rs993925位點G/A多態(tài)性在潮汕地區(qū)正常人群中的分布為：GG型29.4%、GA型50.7%，AA型19.9%，等位基因G：54.79%、A：45.3%，男女之間基因型及等位基汕頭大學醫(yī)學院碩士研究生畢業(yè)論文
　　因頻率無顯著差異（P<0.05）。與中國北京地區(qū)、日本和歐洲人群沒有顯著性差異，但與非洲人群相

15、比差異顯著（P<0.01）。
　　2.CHF組和對照組相比，TGFβ2基因rs993925 G/A多態(tài)位點GG、GA、AA基因型頻率在COPD組中分別為25.9%、55.1%和19.0%，在對照組中分別為29.4%、50.7%和19.9%，G和A等位基因的頻率在COPD組中分別為0.535和0.465，在對照組分別為0.547和0.453，該位點基因型和等位基因分布在COPD組與對照組P值分別為0.698，0.740，差異均無統計

16、學意義。不管在顯性、隱性或共顯性遺傳模式中，TGFβ2基因rs993925 G/A多態(tài)性均與COPD的發(fā)病無相關性。
　　3.COPD組不同基因型患者間性別組成、年齡、吸煙指數、體重指數（BMI）、肺功能指標（FEV1及FEV1/FVC）、呼吸困難程度（mMRC評分）的比較上無明顯差異。不同GOLD分組間比較，三種基因型的分布無明顯差異。
　　結論：
　　1.廣東潮汕地區(qū)正常人群TGFβ2基因rs993925位點G/A