幽門螺桿菌侵入胃粘膜上皮細胞對細胞功能的影響及其機制.pdf

1、目的:長期以來幽門螺桿菌(helicobacter pylori,Hp)被認為是一種胞外菌,近年有研究發(fā)現(xiàn),Hp可侵入胃上皮細胞,并可在細胞內(nèi)繁殖存活,本課題旨在通過研究侵入胞內(nèi)的Hp對胃上皮細胞功能的影響,探討Hp侵入胞內(nèi)的致病作用及其機制。
　　方法:從本實驗室保存的Hp菌株中選擇2株高侵襲力菌株(標準株NCTC11637及臨床株T494)和2株低侵襲力菌株(標準株SS1及臨床株T049),分別感染人胃腺癌上皮細胞(AGS細胞

2、)(MOI=100),以抗β1整合素抗體預處理阻止侵襲為對照組,經(jīng)慶大霉素保護性侵襲實驗,采用以下方法檢測侵入胞內(nèi)Hp對細胞功能的影響:①CCK8法檢測細胞的增殖;②流式細胞儀檢測細胞凋亡;③ELISA檢測白細胞介素因子8(interleukin-8,IL-8)的表達;④細胞免疫熒光檢測活化誘導胞嘧啶核苷脫氨酶(activation-inducedcyti dinedeaminase,AID)蛋白的表達;⑤實時定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(

3、Real Time-PCR)分析AID的轉(zhuǎn)錄水平;⑥螢火蟲熒光素酶評價核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性。用SN-50預處理AGS細胞以抑制NF-κB活性,重復上述①-⑤的檢測實驗。
　　結(jié)果:1、侵入胞內(nèi)的Hp⑴促進AGS細胞的增殖,高侵株NCTC11637、T494作用的細胞增殖率(37.72％和36.51%)均高于低侵株SS1、T049(26.97%和26.17%),抗β1整合素抗體處理后各組AGS細胞的增殖率均降低(p<0.05);

4、⑵不影響AGS細胞的凋亡,高侵株NCTC11637、T494凋亡率(2.79%和2.51%)和低侵株SS1、T049凋亡率(2.70%和2.44%)均與control組的2.62%相當;⑶誘導IL-8的表達,高侵株NCTC11637、T494誘導的IL-8濃度(9.94pg/ml和9.10pg/ml)均高于低侵株SS1、T049(6.31pg/ml和6.30pg/ml),抗β1整合素抗體處理后各組IL-8的濃度均下降(p<0.05);⑷

5、刺激AGS細胞表達AID蛋白,AID蛋白定位于胞漿。高侵株NCTC11637、T494誘導的AID平均熒光強度值(14.48和13.48)均高于低侵株SS1、T049(11.07和9.96),高侵株NCTC11637、T494誘導的AID基因的mRNA相對表達量(1.57和1.55)均高于低侵株SS1、T049(1.35和1.23);抗β1整合素抗體處理后各組AID蛋白和mRNA的表達均減少(p<0.05);⑸激活NF-κB通路,高侵株

6、NCTC11637、T494的相對熒光素酶活性值(1.57和1.55)均高于低侵株SS1、T049(1.35和1.23),抗β1整合素抗體處理后各組NF-κB的相對熒光素酶活性值均降低;⑹NF-κB抑制劑SN-50處理后各組AGS細胞增殖率降低,IL-8、AID蛋白和mRNA表達水平均降低。
　　結(jié)論:⑴侵入胞內(nèi)的Hp可促進AGS細胞增殖但不影響細胞凋亡,可誘導IL-8和AID的異常表達;⑵侵入胞內(nèi)的Hp可通過激活NF-κB通路參