米非司酮對人早孕絨毛及蛻膜中骨橋蛋白、絨毛膜促性腺激素-β和P53蛋白表達影響的研究.pdf

1、目的：米非司酮(又名RU486)，是一種合成類固醇，其結構類似炔諾酮，具有抗孕酮、抗糖皮質激素和輕度抗雄激素特性。其結合位點是孕激素受體。較早的研究認為米非司酮抗早孕的機制是高濃度孕激素使蛻膜發(fā)生變性、壞死，導致絨毛滋養(yǎng)層細胞變性、胚胎死亡而終止妊娠。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)米非司酮可直接作用于絨毛滋養(yǎng)層細胞，使米非司酮的抗早孕機制更加復雜。米索前列醇與胚胎死亡無直接關系，但可使子宮平滑肌的收縮以排出壞死胚胎組織。米非司酮作為孕激素受體拮抗

2、劑，不僅影響孕酮的生物學效應，對妊娠及其產物的代謝和形態(tài)結構的影響也是多方面的。其作用機制仍在探索之中。 骨橋蛋白(OPN) 是細胞外基(ECM)中的一種重要的分泌型細胞因子，它含有精-甘-d冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)序列，其主要的受體為整合素a<,v>B<,3>，二者相互作用共同參與細胞的聚集、黏附、增殖和遷移及免疫調節(jié)一系列重要過程。骨橋蛋白受孕激素調控，機體內多種組織細胞均能合成并分泌該因子。研究表明，豬妊娠

3、30d后沿著整個子宮-胎盤交接面都有OPN蛋白表達。此外，妊娠期子宮內膜致密層內的免疫細胞也有OPN的mRNA和蛋白表達。因此，推斷OPN表達于子宮內膜上皮和免疫細胞，與其受體(如整合素)一起作用于孕囊和子宮以促進孕囊發(fā)育，在胚泡粘附和胎盤形成中起關鍵作用。另外OPN與整合素a<,v>B<,3>同時表達于滋養(yǎng)層細胞上，胎盤絨毛滋養(yǎng)層細胞可分泌OPN，通過促進細胞間黏附，誘導細胞趨化使滋養(yǎng)層遷徙，從而調節(jié)受精卵的定位、黏附、植入。OPN表

4、達的不足或過量可能會導致疾病，如不明原因的不孕、流產、早產或子宮內膜異位癥、滋養(yǎng)層細胞疾病等。絨毛膜促性腺激素-B (B-HCG)是由胎盤合體滋養(yǎng)層細胞產生并分泌，是在母體血液中最早可測到的一種糖蛋白激素，由a，B兩個鏈組成，其中B-HCG的抗原特異性強，能更精確地反映HCG在人體血、尿中的濃度，測定血B-HCG值在一定程度上反應了胚胎發(fā)育的活力。B-HCG 作為妊娠的特異性標志物，其功能是維持早期妊娠黃體的繼續(xù)生長，刺激黃體產生雌、孕

5、激素，以維持妊娠，直至完全被胎盤取代。血B-HCG的產生與滋養(yǎng)層細胞的數(shù)量和發(fā)育有關。Bischof等報道米非司酮能顯著抑制體外培養(yǎng)的胚胎滋養(yǎng)層產B-HCG和妊娠相關a血漿蛋白(PAPP-A)，該抑制效應能被孕激素(對PAPP-A 和 B-HCG)和皮質醇(對B-HCG)消除。 P53蛋白最早是在1979年首次被發(fā)現(xiàn)，其分子量53kD，故取名P53。P53是一種同源致癌基因，參與細胞周期的調節(jié)和凋亡的發(fā)生。P53的表達在調節(jié)胚

6、胎滋養(yǎng)層的動態(tài)平衡中起著不可缺少的作用。米非司酮誘導P53蛋白的上調可能在母胎界面的凋亡中起著重要作用。P53的另一重要作用是誘導凋亡。P53直接參與細胞凋亡過程，主要通過降低Bcl-2和升高Bax的表達來實現(xiàn)。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，在用米非司酮終止妊娠過程中，母胎界面相關細胞中Bcl-2表達降低，同時Bax升高。迄今為止，米非司酮對早孕絨毛及蛻膜組織的OPN表達的研究國內外未見報道。本實驗采用免疫組織化學SP法，透射電鏡技術來研究米非司酮

7、對早孕絨毛及蛻膜組織中OPN、B-HCG和P53蛋白表達的影響，進一步探討米非司酮抗早孕的機制，并為OPN在胚泡著床和胎盤形成過程中的重要作用提供理論依據(jù)。 方法: 1.取材 (1) 實驗組(米非司酮組)：自愿要求終止妊娠的早孕婦女20例，均為首次服用米非司酮50mg，繼后25mg，每日2次，總量150 mg，于第三d晨8∶00加服米索前列醇60μg，留院觀察，孕囊排出后即刻收集絨毛組織及蛻膜。 (2)

8、對照組(手術流產組)：自愿要求終止妊娠的早孕婦女20例，均為行負壓吸引人工流產術，術畢即刻收集絨毛組織及蛻膜。 2.光鏡技術 應用HE染色、免疫組織化學染色SP法，結果結合圖像分析檢測OPN、B-HCG和P53蛋白表達情況。 3.電鏡技術 取米非司酮組和手術流產組絨毛組織，透射電鏡下觀察非司酮組和手術流產組的絨毛組織形態(tài)結構。 結論: 1.OPN表達于細胞質和/或細胞膜上，OPN在早孕絨毛

9、及蛻膜的陽性表達米非司酮組顯著低于手術流產組，具有顯著性差異。米非司酮藥物流產后，OPN表達降低，這一結果提示米非司酮可能抑制了早孕絨毛及蛻膜中OPN的合成，使滋養(yǎng)層細胞和蛻膜細胞的黏附、增殖和遷移能力下降，影響了胚泡著床和胎盤的形成，導致流產。 2.B-HCG表達于細胞質和/或細胞膜上。B-HCG在早孕絨毛及蛻膜的陽性表達米非司酮組顯著低于手術流產組，具有顯著性差異。這一結果提示米非司酮可能抑制了早孕絨毛及蛻膜中B-HCG的合