β-人絨毛膜促性腺激素定量檢測試劑盒的開發(fā).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、人絨毛膜促性腺激素(hCG)由α和β兩個亞基通過離子鍵和疏水鍵結合在一起,分子量大約為39KD,由合體滋養(yǎng)層細胞分泌,為人體胎盤和黃體細胞中產生的一種糖蛋白激素,對著床和胚胎營養(yǎng)有很大作用[1-4]。同時對于婦科炎癥、絨毛膜疾病有一定的輔助診斷價值[5,6]。本論文主要進行β-人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)免疫檢測系統(tǒng)(化學發(fā)光法)的研發(fā)過程探討及性能評估。
  研究方法:
  將鄭州伊美諾公司制備的62株β位點抗體進行配

2、對篩選,根據抗原抗體的最優(yōu)化反應原則,確定包被、樣品稀釋液、酶結合物和反應模式。并建立校準品系統(tǒng),試劑盒的線性范圍、重復性、準確性、最低檢測限、特異性及穩(wěn)定性指標。檢測1302例健康人血清,以測定值的99%為界限,通過SPSS軟件計算參考區(qū)間。與兩家醫(yī)療機構合作,進行不同病理人群考核,驗證試劑盒的臨床準確性。
  結果:
  篩選出最優(yōu)的1對抗體作為試劑盒開發(fā)的原材料,并確定了原材料的質量標準及工藝及反應體系。包被:PH6.

3、5,0.2M PB,0.5μg/mL;酶結合物:PH7.5,0.01M Tris-HCl,50%小牛血清;樣品稀釋液:PH7.5,0.01M TAPS,3%牛血清白蛋白;校準品:PH7.5,0.01M PBS,3%牛血清白蛋白,校準品溯源到國際參考品77364。反應體系:兩步法,37℃溫育60+30分鐘,洗滌5次;底物A、B分別加入50μL,5分鐘內測定。試劑盒可以使用的樣本為血清。校準曲線的建立為發(fā)光值取對數后,采用四參數擬合方式建立

4、校準曲線。試劑盒的線性范圍為1.0~1000mIU/mL;分析內變異、分析間變異和批間變異均不超過10%;測定500mIU/mL的LH、500mIU/mL的FSH、500μIU/mL的TSH,檢測結果均不超過1.0mIU/mL;樣本中添加50mg/dL的膽紅素、150mg/dL的血紅蛋白和6000mg/dL的甘油三酯對測定結果的影響小于10%;最低檢測限測定值不超過1.0 mIU/mL,回收率在0.85-1.15之間??疾榱苏自噭┖械?/p>

5、加速穩(wěn)定性、拆封穩(wěn)定性和實時穩(wěn)定性,結果均符合要求。參考值設定為5.0 mIU/mL。臨床研究:在兩家醫(yī)療機構(河南省人民醫(yī)院和河南省中醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院)分別測定110例和236例臨床樣本,結果顯示河南省人民醫(yī)院結果:考核試劑盒與對比試劑盒的陽性符合率為100%,陰性符合率為100%,總符合率為100%。河南省中醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院結果:考核試劑盒與對比試劑盒的陽性符合率為99.01%,陰性符合率為100%,總符合率為99.03%,兩者

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