白藜三醇對培養(yǎng)豚鼠心室肌細胞鈣電流的影響.pdf

1、心肌細胞外的鈣離子進入細胞內以及細胞內的鈣轉運受到細胞膜和肌漿網上諸多蛋白質的調控，維持著細胞內鈣離子濃度的動態(tài)平衡狀態(tài)。細胞內的鈣離子濃度異常不但影響興奮一收縮耦聯的過程，還可以引發(fā)心律失常，影響心肌的能量代謝，作為第二信使，影響細胞增殖，分化的多種通路以及影響線粒體的氧化磷酸化酶等多種作用。心肌細胞膜的表面存在兩種電壓調控的鈣通道：L-及T-型鈣通道。L-型鈣通道由于其電導較大及通道開放時間長而得名，是胞外鈣離子進入細胞的主要通道，

2、而T-型鈣通道則源于其低電導和短暫的通道開放時間。生理情況下，大多數哺乳動物在出生后不久，心室肌細胞的T-型鈣通道逐漸的減少甚至消失，成年哺乳動物的心室肌細胞中常缺如，但少數動物如豚鼠成年后心房及心室肌細胞內仍可表達此通道。已有的研究報道白藜三醇不僅對急性分離的豚鼠心室肌細胞的Ica-L有抑制的作用，而且對INa，Iks，Iss,Ito均具有抑制作用且呈濃度依賴性，初步顯示出白藜三醇具有延長動作電位時程和心室有效不應期，減少室性心律失常

3、發(fā)生的潛在作用。為了進一步探討白藜三醇抑制心律失常發(fā)生的可能機制、了解其對心室肌細胞鈣電流的慢性作用，本研究采用全細胞膜片鉗技術觀察白藜三醇對培養(yǎng)不同時間的豚鼠心室肌細胞鈣電流密度的變化。 目的:研究白藜三醇干預豚鼠心室肌細胞不同時間后鈣電流密度的變化，探討該藥物的可能作用機制。 方法 　　1.豚鼠心室肌細胞的分離與培養(yǎng)：雄性成年豚鼠，體重250-350g，應用Langendorff心臟灌流裝置上逆行灌流，酶解分

4、離出單個心室肌細胞，接種于培養(yǎng)皿中，加入受試藥物白藜三醇，分為對照組，低劑量濃度組(RES 10μM)，中劑量濃度組(RES 30μM)，高劑量濃度組(RES100μM)，分別孵育24、48和72小時. 　　2.采用全細胞膜片鉗技術，分別記錄不同時間點的L-和T-型鈣通道電流。 結果 　　1.白藜三醇對培養(yǎng)豚鼠心室肌細胞L-型鈣電流密度的作用　　(1)培養(yǎng)72h時，RES 30μM和RES 100μM使Ica-L

5、密度分別下降13％和27％，呈現出濃度依賴性抑制趨勢，RES 100μM組與對照組之間有統(tǒng)計學差異(2.54±0.35 pA/pF vs.3.48±0.42 pA/pF,P<0.05)； (2)RES 10μM，RES 30μM和RES 100μM對Ica-L密度的抑制作用呈現時間依賴性，RES 100μM在72h和24h之間有統(tǒng)計學差異(2.54±0.35 pA/pF vs.3.33±0.48 pA/pF,P<0.05)；

6、 2.白藜三醇對培養(yǎng)豚鼠心室肌細胞T-型鈣電流密度的作用(1)T-型鈣電流密度在同一作用時間點呈現出隨著白藜三醇濃度的增大，電流呈減少趨勢，在72h時，RES 100μM組與對照組之間有統(tǒng)計學差異(2.61±0.64.10pA/pF vs.4.79±0.67 10pA，pF，P<0.05)； (2)同一濃度的白藜三醇在不同作用時間點(24h，48h，72h)，T-型鈣電流密度均呈現出隨著時間的延長而減少的趨勢，但未顯示出統(tǒng)計