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文檔簡介
1、目的:
母孕期酒精暴露可能導致胎兒心臟發(fā)育異常,但其發(fā)生機制尚不十分清楚??偹苤凭巧钪谐R姷闹禄镔|,能夠引起心肌細胞凋亡和心臟發(fā)育異常。我們課題組前期研究表明組蛋白乙?;诰凭┞兑鹦呐K發(fā)育異常中起到關鍵作用。這篇文章進一步探討組蛋白乙?;欠裨诰凭鸬男募〖毎蛲鲋邪l(fā)揮了重要作用。
方法:
?。?)C57孕鼠隨機分為酒精組和對照組,于E7.5天分別給予56%酒精(10μl/g)和等量生理鹽水灌
2、胃至E15.5天,收集E17.5天胎鼠心臟進行以下檢測:
?、賅esternblot檢測組蛋白H3K9乙?;?;
?、赒-PCR檢測凋亡基因caspase-3、caspase-8和bcl-2 mRNA表達水平,Westernblot檢測caspase-3、active-caspase-3、caspase-8、active-caspase-8和bcl-2蛋白表達水平;
?、跜hIP-Q-PCR檢測凋亡基因casp
3、ase-3、caspase-8和bcl-2啟動子區(qū)域組蛋白H3K9乙?;剑?br> ?、躎UNEL檢測心肌細胞凋亡水平。
?。?)心肌祖細胞分為酒精組、姜黃素組、酒精+姜黃素組、對照組、DMSO組,分別給予120μl PBS、200mM酒精、25μM姜黃素、200mM酒精+25μM姜黃素、25μl DMSO,干預24小時后收集細胞進行以下檢測:
?、賅estern blot檢測組蛋白H3K9乙?;?;
?、?/p>
4、Western blot檢測caspase-3、active-caspase-3、caspase-8、active-caspase-8和bcl-2蛋白表達水平;
?、哿魇綑z測細胞凋亡。
結果:
?。?)Westernblot結果顯示酒精暴露后,組蛋白 H3K9乙酰化水平明顯升高(P<0.05)。
?。?)Q-PCR結果顯示酒精暴露后,胎鼠心臟凋亡基因caspase-3、caspase-8 mRNA水平升
5、高,抗凋亡基因bcl-2 mRNA水平降低(P<0.05)。Westernblot結果顯示酒精暴露引起 active-caspase-3和active-caspase-8表達升高,引起caspase-3、caspase-8和bcl-2表達降低(P<0.05)。
?。?)ChIP-Q-PCR結果顯示酒精暴露后,caspase-3和caspase-8啟動子區(qū)域組蛋白H3K9乙?;缴?,而 bcl-2啟動子區(qū)域組蛋白H3K9乙?;?/p>
6、水平降低(P<0.05)。
(4)TUNEL結果顯示酒精暴露引起胎鼠心肌細胞凋亡水平升高,而對照組無凋亡細胞出現(xiàn)(P<0.05)。
?。?)Westernblot結果顯示酒精干預能夠引起心肌祖細胞組蛋白H3K9乙酰化水平升高(P<0.05),而姜黃素干預能夠阻斷酒精引起的組蛋白H3K9高乙?;≒<0.05)。
?。?)Westernblot結果顯示酒精干預能夠引起心肌祖細胞凋亡基因active-caspase
7、-3和active-caspase-8表達升高,引起caspase-3、caspase-8和bcl-2表達降低(P<0.05),而姜黃素干預能夠阻斷該變化。
?。?)流式細胞術結果顯示酒精干預能夠引起心肌祖細胞凋亡水平升高(P<0.05),而姜黃素干預能夠阻斷酒精引起的心肌祖細胞凋亡水平升高(P<0.05)。
結論:
?。?)酒精暴露可能通過上調組蛋白 H3K9乙?;蕉鹦募〖毎蛲?。
?。?)組
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