電針和BMSCs移植聯(lián)合應用對大鼠腦出血病灶周圍微環(huán)境影響的實驗研究.pdf

1、目的:觀察電針和骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植聯(lián)合應用對腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH)病灶及周圍微環(huán)境的影響,探討神經(jīng)元修復的機制。
　　方法:1.將復蘇的BMSCs培養(yǎng)貼壁達80％時,將培養(yǎng)液更換為預誘導液培養(yǎng)24小時后,再更換為無血清誘導液誘導6h。收集細胞備用。2.采用膠原酶及肝素注入尾狀核制備大鼠ICH模型。3.術

2、后分別在2h、24h、48h時間點對SD大鼠進行神經(jīng)功能評分(Neurological Severity Score,NSS)評分,評分大于9分者則納入實驗。并隨機分為:對照組(control組)、細胞移植組(BMSCs組)、電針與細胞移植聯(lián)合組(electro-acupuncture combined with BMSCs transplantation, Ea BMSCs組)。4.在術后第3天時通過腦立體定位儀導航,將20ml0.9

3、％生理鹽(Normal saline,NS)水和BMSCs懸液移植入ICH病灶中。根據(jù)移植后喂養(yǎng)天數(shù)每組再分為:1d、3d、5d、7d、14d五個亞組。移植2h后,對EaBMSCs組取大椎穴和百會穴,進行電針治療,每天一次,直至處死。5.對各組SD大鼠每天行NSS評分一次,直至處死取材。6.通過蛋白免疫印跡(Wetern Blotting,WB)方法檢測各組不同時間點神經(jīng)生長因子(nerve growth factor,NGF)、腦源性

4、神經(jīng)營養(yǎng)因子( brain derived neurophic factor, BDNF)、β-微管蛋白(tubulin)Ⅲ及甘油醛-3-磷酸脫氫酶( glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)蛋白表達變化情況。
　　結果:1.制備大鼠ICH模型成功后,移植細胞前對control組、BMSCs組、Ea BMSCs組進行NSS評分,各組之間評分無顯著性差異;移植后第5天時,移植后第5

5、天,BMSCs組評分顯著低于control組(P<0.05);Ea BMSCs組(除1d外)明顯低于control組,(P<0.05)。Ea BMSCs組和control組相比較(除1d外)均有顯著差異,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。改善神經(jīng)功能缺失癥狀更明顯。2.Ea BMSCs組和BMSCs組的NGF蛋白表達明顯增加;于移植后7天、14天,BMSCs組較control組增加顯著,有統(tǒng)計學意義(P<0.05);Ea BMSCs組與BM

6、SCs組和control組比較(除1d外)增加更明顯,差異有統(tǒng)計學(P<0.05)。Ea BMSCs組大鼠ICH病灶周圍 NGF蛋白表達上調更明顯。3.Ea BMSCs組和BMSCs組BDNF蛋白表達明顯增加,移植后5天、7天、14天時,較control組差異顯著有統(tǒng)計學意義(P<0.05);在移植后第3天、5天、14天, Ea BMSCs組較BMSCs組表達增加顯著,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Ea BMSCs組較單純BMSCs組和

7、control組大鼠ICH病灶周圍BDNF蛋白表達上調更明顯。4.在同一時間點,Ea BMSCs組和BMSCs組與control組比較β-tubulinⅢ蛋白表達明顯增加;在移植后5天、7天、14天, BMSCs組較control組增加顯著,有統(tǒng)計學意義(P<0.05);Ea BMSCs組(除移植1天)均較BMSCs組明顯增加,有統(tǒng)計學意義P<0.05)。電針和BMSCs移植聯(lián)合應用較單純BMSCs移植,更利于神經(jīng)元的修復。